构建稳定表达荧光素酶基因（lux）的产酸克雷伯菌，旨在更直观地观察产酸克雷伯菌（K. oxytoca）在宿主体内的分布以及评估不同杀菌方法的效果。

扩增pBAV1k-T5-Lux质粒的荧光素酶基因簇（Lux A/B/C/D/E），构建含有Lux A/B/C/D/E基因簇的pBBR1质粒（pBBR1-lux），并获得能够表达荧光素基因基团的大肠埃希菌（E. coli-pBBR1-lux）。将pBBR1-lux质粒电转化至产酸克雷伯菌感受态细胞，经荧光强度鉴定及菌株的3次传代，筛选能够稳定表达lux基因的产酸克雷伯菌（K. oxytoca-pBBR1-lux）。

连接成功的环状质粒产物命名为pBBR1-lux。与大肠埃希菌对照株相比，含E. coli-pBBR1-lux的Luminesence荧光信号值显著升高[15 345（14 676，18 654） vs. 63（60，82）]，差异具有统计学意义（t = 21.14、P = 0.035）。K. oxytoca-pBBR1-lux的Luminesence荧光信号值[399 303（265 245，617 192）]显著高于产酸克雷伯菌对照菌株[83（63.5，86.75）]，差异具有统计学意义（t = 7.07、P = 0.014）。E. coli-pBBR1-lux和K. oxytoca-pBBR1-lux均能够在Veritas微孔板光度计和小动物成像仪上检测到Luminesence荧光信号。将所得菌株按照1︰10稀释6个梯度，荧光值检测结果显示，Luminesence值随菌落浓度降低而下降。多次传代后pBBR1-lux能够在产酸克雷伯菌中稳定表达荧光素酶，不同理化杀菌方法对产酸克雷伯菌杀菌效果不同，紫外线和84消毒液（10%）是最有效的杀灭产酸克雷伯菌方法。

本研究获得了可被微孔板光度计和小动物成像仪检测到的稳定表达荧光素酶的K. oxytoca-pBBR1-lux。

探讨人高迁移率族蛋白B1（HMGB-1）、晚期糖基化终产物受体（RAGE）、C反应蛋白（CRP）与脑外伤术后肺部感染严重程度的相关性及对预后的评估价值。

前瞻性选取2016年5月至2018年5月于长治医学院附属和平医院接受治疗的182例脑外伤术后肺部感染者，根据肺部感染CURB-65评分系统标准将患者分为轻度组（74例）、中度组（60例）和重度组（48例），并根据术后30 d临床结局分为生存组（151例）和死亡组（31例）。比较不同感染程度患者血清HMGB-1、RAGE、CRP水平并分析与肺部感染严重程度的相关性。通过Logistic回归分析明确影响患者死亡的危险因素，以受试者工作特征曲线（ROC）评价HMGB-1、RAGE和CRP对脑外伤术后肺部感染者死亡的预测价值。

重度组患者HMGB-1水平为（10.22 ± 2.35）μg/L，分别高于中、轻度组[（3.89 ± 1.01）μg/L和（2.00 ± 0.40）μg/L]，差异有统计学意义（t = 18.821、29.502，P均< 0.001）；重度组患者RAGE水平为（9.01 ± 2.05）ng/L，分别高于中、轻度组患者[（5.89 ± 1.20）ng/L和（2.12 ± 0.22）ng/L]，差异有统计学意义（t = 9.870、28.722，P均< 0.001）；重度组患者CRP水平为（50.33 ± 10.32）mg/L，分别高于中、轻度组患者[（32.33 ± 8.52）mg/L和（15.20 ± 3.52）mg/L]，差异有统计学意义（t = 9.930、27.010，P均< 0.001）。中度组患者血清HMGB-1、RAGE和CRP水平均高于轻度组（t = 14.744、26.504、15.729，P均< 0.001）；血清HMGB-1、RAGE和CRP水平均与肺部感染CURB-65评分呈正相关（r = 0.696、0.763、0.851，P均< 0.001）。182例患者的病死率为17.03%（31/182）。死亡组患者呼吸机应用、气管切开、低蛋白血症占比均显著高于生存组，年龄、HMGB-1、RAGE、CRP、降钙素原（PCT）水平均高于生存组（P均< 0.05）。Logistic回归分析年龄、呼吸机应用、气管切开、低蛋白血症、HMGB-1、RAGE、CRP和PCT均为导致患者死亡的危险因素（OR = 2.016、2.423、2.252、1.853、2.606、2.199、1.919、1.904，P均< 0.05）。ROC曲线分析显示血清HMGB-1、RAGE和CRP预测脑外伤术后肺部感染者死亡的敏感性分别为78.02%、82.42%和85.16%，特异度分别为56.04%、69.78%和71.98%，曲线下面积（AUC）分别为0.756、0.801和0.882。

血清HMGB-1、RAGE和CRP水平与脑外伤术后肺部感染严重程度呈正相关，且均为导致患者死亡的危险因素，对于预测患者的死亡有较高的临床价值。

探讨活化蛋白C（APC）、脑钠肽（BNP）及急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHE Ⅱ）评分在老年重症肺炎患者中的动态变化，并分析其与预后的相关性。

选取2016年6月至2018年6月于成都市西区医院诊治的288例老年重症肺炎患者为研究对象，根据患者28天生存情况分为生存组（168例）和死亡组（120例）。用化学发光法和酶联免疫吸附法检测各组患者血清APC和BNP表达水平，用APACHE Ⅱ评分评估各组患者预后，分析两组患者入组后第1天、第4天和第7天APC、BNP和APACHE Ⅱ评分的动态变化；应用Logistic回归分析影响老年重症肺炎预后的危险因素，采用ROC曲线分析3项指标联合预测老年重症肺炎预后的价值。

与死亡组患者相比，生存组患者入组后第1天、第4天和第7天BNP水平[（494.62 ± 34.82）pg/ml、（318.42 ± 27.42）pg/ml和（274.61 ± 20.84）pg/ml]和APACHE Ⅱ评分[（24.05 ± 4.82）、（18.62 ± 3.71）和（12.13 ± 2.62）]显著增高，差异均有统计学意义（P均< 0.001），但APC水平[（289.34 ± 18.39）ng/ml、（357.64 ± 32.71）ng/ml和（427.25 ± 18.45）ng/ml]则显著降低，差异均有统计学意义（t = 5.512、35.499、78.552，P均< 0.001）。生存组患者随住院时间延长，其BNP水平与APACHE Ⅱ评分逐渐降低（F = 24.538、P < 0.001；F = 12.945、P < 0.001），而APC水平则逐渐升高（F = 23.947、P < 0.001）。死亡组患者随住院时间的延长，其BNP水平[（749.14 ± 42.92）pg/ml、（814.62 ± 50.47）pg/ml和（904.25 ± 57.15）pg/ml]与APACHE Ⅱ评分[（28.34 ± 5.17）、（34.51 ± 6.35）和（39.55 ± 7.32）]逐渐升高，差异有统计学意义（F = 15.302、P < 0.001，F = 10.389、P < 0.001）；而APC水平[（276.23 ± 21.84）ng/ml、（226.38 ± 28.26）ng/ml和（183.43 ± 33.81）ng/ml]逐渐下降，差异有统计学意义（F = 34.165、P < 0.001）。生存组和死亡组在吸烟史[36.90%（62/168） vs. 53.33（64/120）]、慢性呼吸系统病史[（46.43（78/168） vs. 65.83（79/120）]、氧分压[（83.27 ± 6.92）mmHg vs. （76.82 ± 8.65）mmHg]及机械通气方面[35.12（59/168） vs. 52.50（63/120）]，差异均有统计学意义（χ² = 7.677、P = 0.006，χ² = 10.630、P = 0.001，t = 9.881、P < 0.001，χ² = 8.661、P = 0.003）。Logistic回归分析显示，机械通气（OR = 4.627，P < 0.001）、APC（OR = 2.637，P = 0.012）、BNP（OR = 3.325，P = 0.005）和APACHE Ⅱ评分（OR = 4.831，P < 0.001）均为影响老年重症肺炎预后的独立危险因素。ROC曲线显示，与APC、BNP或APACHE Ⅱ评分单项指标预测比较，3项指标联合预测老年重症肺炎死亡的敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值（89.42%、81.61%、84.72%和86.03%）均显著升高。

APC、BNP和APACHE Ⅱ评分在老年重症肺炎疾病转归中变化明显，为影响老年重症肺炎预后的独立危险因素，3项指标联合可显著提高其预后预测价值。

初步评估三维显微定量超声对于乙型肝炎肝硬化及肝功能失代偿的诊断价值。

收集2016年1月至2017年12月青海省第四人民医院住院患者共270例，分为慢性乙型肝炎（CHB）组（102例）、代偿期肝硬化（LC）组（84例）和失代偿期LC组（84例）。入组患者均行三维显微定量超声检查、二维剪切波弹性成像检查及肝功能、血常规等检查。计算患者的天门冬氨酸氨基转移酶和血小板比率指数（APRI）评分。比较3组患者间三维显微定量超声、二维剪切波弹性成像（2D-SWE）和APRI评分差异。评价三维显微定量超声、2D-SWE和APRI评分指标对于LC以及LC相关肝功能失代偿的预测价值、灵敏度和特异度。

3组患者三维显微定量超声和肝脏硬度差异均有统计学意义（F = 313.52、173.36，P均< 0.001）。三维显微定量超声预测LC的受试者操作曲线下面积为0.925（95%CI：0.885～0.965，P < 0.001），取三维显微定量超声临界值为11.5分，其诊断LC的敏感度和特异度分别为85.7%和90.2%；三维显微定量超声预测LC相关肝功能失代偿的受试者操作曲线下面积为0.850（95%CI：0.795～0.905、P < 0.001），取三维显微定量超声临界值为16.5分，其诊断肝功能失代偿的敏感度和特异度分别为60.7%和89.3%。

本研究建立了基于三维显微超声技术的定量诊断标准，该标准可用于LC及失代偿LC的辅助诊断。

探讨合并人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的男男性行为（MSM）人群发生肛门直肠尖锐湿疣的临床特征及心理状态。

分析2015年7月至2017年6月于四川洲际胃肠肛门病医院住院治疗的64例合并HIV感染的男男性行为人群中发生肛门直肠尖锐湿疣患者临床特征以及90项症状清单（SCL-90）量表心理评估情况。

合并HIV感染的MSM人群中，肛周直肠尖锐湿疣主要见于18～45岁男性（61例，84.72%），其中大学学历患者47例（73.44%）；经典型尖锐湿疣患者56例（87.50%），扁平型尖锐湿疣患者8例（12.50%）。人乳头状瘤病毒（HPV）阳性率为81.25%（52例，52/64），以HPV11型为主（占50.00%，26/52）。SCL-90量表心理评估显示，负面心理情绪患者59例（92.19%），主要表现为抑郁（48例、75.0%）和焦虑（7例、10.94%）。

合并HIV感染的MSM人群中，肛周直肠尖锐湿疣主要见于青壮年，临床表现以经典型为主，心理状态以抑郁、焦虑为主。

建立乳铁蛋白-DNA复合物的相对定量检测方法，评价甲型H1N1重型流感及其他病原体感染者血浆样本中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的含量。

将DNA含量明确的血浆样本进行梯度稀释作为标准品，应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中乳铁蛋白-DNA复合物含量。采用乳铁蛋白-DNA ELISA方法比较19例甲型H1N1重症流感患者与19例献血者（对照组）血浆乳铁蛋白-DNA复合物含量差异。

甲型H1N1重型重症流感患者血浆中乳铁蛋白-DNA复合物水平与游离DNA（cfDNA）和组蛋白-DNA复合物水平均呈正相关（r = 0.6763、P < 0.0001，r = 0.7560、P < 0.0001）。甲型H1N1重症流感患者血浆中乳铁蛋白-DNA复合物含量为[2.082（1.169，5.021）μg/ml]，显著高于对照组[0.233（0.170，0.376）μg/ml]，差异有统计学意义（P < 0.0001），且乳铁蛋白-DNA复合物含量与甲型H1N1重症流感患者的急性生理与慢性健康评分（APACHEⅡ评分）呈正相关（r = 0.7379、P = 0.0005）。

血浆乳铁蛋白-DNA复合物含量可用于评价甲型H1N1重症流感患者NETs水平。

探讨感染性新生儿肺炎免疫功能变化及其临床意义。

选取2016年3月至2017年10月深圳市龙华区中心医院新生儿科收治的感染性新生儿肺炎60例为观察组，同期选取健康新生儿60例为对照组。根据肺炎严重程度将观察组分为两个亚组：轻症组（39例）和重症组（21例）；根据新生儿感染性肺炎分期差异分为两个亚组：急性期组（24例）和恢复期组（36例）。入组患儿均于急性期、恢复期采集血样，用于体液免疫指标（免疫球蛋白IgA、IgM、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4及补体C3、C4水平）和细胞免疫指标（CD3⁺ T、CD4⁺ T、CD8⁺ T、CD4/CD8、NK细胞）检测。

重症组患儿血清IgA、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4水平、CD3⁺ T细胞、CD4⁺ T细胞、NK细胞比例及CD4/CD8较对照组和轻症组患儿均显著降低（P均< 0.05），IgM、C3、C4水平、CD8⁺ T细胞比例较对照组和轻症组患儿均显著升高（P均< 0.05），差异均有统计学意义。Spearman相关分析发现，血清IgA、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4水平、CD3⁺ T细胞、CD4⁺ T细胞、NK细胞比例及CD4/CD8与新生儿感染性肺炎严重程度呈负相关（r =－0.826、－0.826、－0.665、－0.822、－0.826、－0.816、－0.794、－0.824、－0.820，P均< 0.001）；血清C3水平、CD8⁺ T细胞比例与新生儿感染性肺炎严重程度呈正相关（r = 0.467、0.788，P均< 0.001）。急性期患儿血清IgA、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4水平、CD3⁺ T细胞、CD4⁺ T细胞、NK细胞比例及CD4/CD8均较恢复期和对照组显著降低（P均< 0.05），而血清IgM、C3、C4水平、CD8⁺ T细胞均较恢复期和对照组显著升高，差异均有统计学意义（P均< 0.05）。

感染性新生儿肺炎细胞免疫和体液免疫功能下降，与疾病严重程度呈负相关，且疾病不同阶段对免疫功能影响较大，应对该类患儿免疫功能加强调控。

探讨采用替诺福韦酯（TDF）阻断乙型肝炎病毒（HBV）母婴传播的高HBV DNA载量孕妇分娩后不同停药时间对母婴安全性的影响。

招募2015年1月至2017月12月于深圳市第三人民医院就诊的免疫耐受期HBsAg阳性孕妇109例，均于孕24～28周开始服用TDF治疗，根据简单随机化方法将入组患者分为分娩时停药组（58例）和分娩后4～12周停药组（51例）。定量检测两组孕妇抗病毒治疗后4周、8周、12周、停药时与停药后4周、8周、12周、24周的HBV DNA载量和ALT水平，并定量检测新生儿产后4周HBsAg和HBsAb水平。

所有孕妇分娩前HBV DNA载量均显著降低，较基线水平差异有统计学意义（分娩时停药组：Z = 8.459、P < 0.001；分娩后4～12周停药组：Z = 7.760、P < 0.001）。停药时两组产妇HBV DNA载量差异有统计学意义（Z = 2.242、P = 0.025）。停药后4周两组产妇HBV DNA载量差异无统计学意义（Z = 1.041、P = 0.298），且较基线水平差异均无统计学意义（分娩时停药组：Z = 0.155、P = 0.877；分娩后4～12周停药组：Z = 0.376、P = 0.707）。随访至停药后24周，两组产妇产后ALT升高的发生率差异无统计学意义（χ² = 1.319、P = 0.251），两组产妇ALT升高的中位时间点均在停药后4周，差异无统计学意义（Z = 0.196、P = 0.844）。孕期ALT升高可能引起分娩停药后ALT升高，但并非独立危险因素。20例新生儿在产后4周行外周血HBsAg、HBsAb定量检测，HBsAg均为阴性，均产生保护性抗体。

妊娠中晚期使用替诺福韦酯能有效阻断HBV母婴传播；随访24周发现分娩后停药与延后停药对产后安全性的无显著影响，新生儿4周龄即能产生保护性抗体并有效发挥作用，母乳喂养是安全的。

评估纸片扩散法与Vitek-2 Compact仪器法检测洋葱伯克霍尔德菌体外药敏试验的可靠性。

收集2017年1月至2017年12月绍兴市人民医院临床分离到的34株洋葱伯克霍尔德菌，分别采用纸片扩散法、Vitek-2 Compact仪器法和微量肉汤稀释法检测其对头孢他啶、复方磺胺甲噁唑、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦、替加环素、美罗培南、氯霉素、米诺环素和头孢哌酮/舒巴坦共9种抗菌药物的体外敏感性。以微量肉汤稀释法为参考方法，分别评估纸片扩散法、Vitek-2 Compact仪器法与参考方法的分类一致率（CA%）。

微量肉汤稀释法检测头孢他啶、复方磺胺甲噁唑、左氧氟沙星、美罗培南和氯霉素5种抗菌药物95%可信区间（95%CI）分别为6.2～13.2、0.5～0.8、3.8～6.3、3.7～7.3和5.0～10.0；纸片扩散法检测头孢他啶、复方磺胺甲噁唑、替加环素、氯霉素和米诺环素的体外敏感性结果与参考方法一致率均> 90%；Vitek-2 Compact检测头孢他啶、复方磺胺甲噁唑和左氧氟沙星的体外敏感性结果与参考方法的一致率均> 90%；纸片扩散法和Vitek-2 Compact仪器法检测哌拉西林/他唑巴坦体外敏感性与参考方法一致率最低，均< 80%；Vitek-2 Compact检测替加环素的大错误（ME）为50%；以微量肉汤稀释法为标准，体外敏感性最好的抗菌药物为复方磺胺甲噁唑和米诺环素（均为100%），敏感性最差的抗菌药物为左氧氟沙星（38.2%）。

纸片扩散法和Vitek-2 Compact仪器法检测洋葱伯克霍尔德菌体外药物敏感性，对头孢他啶和复方磺胺甲噁唑均具有较好的可靠性；应用纸片扩散法检测哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的药物敏感性时，应注意可能出现极大错误（VME）及ME。

应用血栓弹力图评价人类免疫缺陷病毒(HIV)阳性的急性冠脉综合征(ACS)患者凝血及血小板功能。

收集2015年4月至2018年2月首都医科大学附属北京地坛医院心内科就诊的HIV阳性ACS患者32例为观察组，同期选取HIV阴性ACS患者为对照组(32例)，应用血栓弹力图及常规凝血及血小板等指标检测患者的凝血及血小板功能，比较两组患者的凝血及血小板功能指标差异，包括反应时间(R)、凝固时间(K)、凝固角(α角)和最大振幅(MA)、阿司匹林和氯吡格雷抵抗率、常规凝血指标及血小板计数等。

两组患者平均年龄、高血压、糖尿病、高脂血症及吸烟、家族史比例差异均无统计学意义(P均>0.05)。HIV阳性ACS患者血栓弹力图指标反应时间(R)显著低于HIV阴性ACS患者(t=－4.00、P <0.01)，凝固时间(K)显著低于HIV阴性ACS患者(t = 2.15、P= 0.03)，凝固角(α角)显著高于HIV阴性ACS患者(t = 2.15、P= 0.03)，差异均有统计学意义。血小板功能指标(MA)以及对抗血小板药物反应性等指标差异均无统计学意义(P均>0.05)。HIV阳性ACS患者常规凝血指标及血小板较对照组差异均无统计学意义(P均>0.05)。TEG参数中R值与APTT具有显著相关性(r = 0.39、P = 0.04)；MA值与血小板计数和纤维蛋白原水平均具有显著相关性(r = 0.47、0.68，P= 0.01、P <0.01)。

HIV感染合并急性冠脉综合征患者常规监测血栓弹力图可提供更多凝血及血小板功能信息。合并HIV感染的ACS患者处于高凝状态，但无需因合并HIV感染而调整抗血小板治疗方案。

探讨基于Logistic回归分析的风险评估对医院感染的预防作用。

回顾性分析本院2008年1月至2014年12月武汉科技大学附属孝感市中心医院1 626例住院患者的临床资料，根据患者住院期间是否发生医院感染分为感染组（520例）和对照组（1 106例）。通过Logistic回归分析确定医院感染危险因素并形成风险评估量表，对2015年1月至2016年2月收治的352例住院患者进行医院感染风险评估。

住院时间> 15 d、使用三联抗菌药物、使用呼吸机、留置导尿管、全身麻醉、合并肝病、合并血液性疾病、合并糖尿病、激素治疗、放疗或化疗、手术时间> 3 h以及侵入性操作均为医院感染的独立危险因素（P均< 0.05）。建立风险评估量表后医院感染发生率为25.00%，低于评估量表建立前的31.98%（χ² = 6.622，P < 0.05）。

基于Logistic回归分析的风险评估模型可有效评估患者感染风险，为医院感染的预防提供依据，并可有效降低医院感染风险。

研究临床肺部感染评分（CPIS）和降钙素原（PCT）对老年重症社区获得性肺炎（SCAP）患者病情和预后的评估价值。

收集2014年2月至2016年2月于本院进行诊治的60例老年SCAP患者为研究对象，根据预后分为生存组和死亡组，检测两组患者入院第1天、第7天的PCT、白细胞（WBC）水平、肺部感染评分（CPIS）评分差异及其与CPIS的相关性。

与入院第1天相比，生存组患者治疗7 d后PCT水平和CPIS值显著下降（P均< 0.001）；治疗前后WBC计数水平差异无统计学意义。与入院第1天相比，死亡组患者治疗7 d后WBC、PCT和CPIS指标差异均无统计学意义。治疗7 d后，组间比较PCT和CPIS差异具有统计学意义（P均< 0.05）；第1天SCAP患者WBC、PCT、CPIS与预后均无相关性；第7天SCAP患者WBC与预后无相关性（P > 0.05），第7天SCAP患者PCT及CPIS与SCAP的预后相关（r = 0.44、P = 0.023，r = 0.58、P = 0.017）。

PCT和CPIS与老年SCAP患者的病情严重程度和预后相关，可作为评估SCAP预后的良好生物学标记，从而指导进一步治疗。