乳铁蛋白-DNA复合物检测评价甲型H1N1重症流感患者血浆中性粒细胞胞外诱捕网水平

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2019.02.007

中华实验和临床感染病杂志(电子版) ›› 2019, Vol. 13 ›› Issue (02) : 122 -127. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2019.02.007

所属专题：专题评论；文献；

论著

乳铁蛋白-DNA复合物检测评价甲型H1N1重症流感患者血浆中性粒细胞胞外诱捕网水平

杨晓宇¹, 张玥², 麦维利¹, 李蕊², 朱鏐娈³, 韩俊燕², 曾辉³^,^†(

)

^1. 100015　北京，北京大学地坛医院教学医院
^2. 100015　北京，首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所；100015　北京，新发突发传染病研究北京市重点实验室
^3. 100015　北京，北京大学地坛医院教学医院；100015　北京，首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所；100015　北京，新发突发传染病研究北京市重点实验室

收稿日期:2018-10-19 出版日期:2019-04-15
通信作者: 曾辉
基金资助:
国家自然科学基金(No. 81570372；No. 81501692)

Lactoferrin-DNA complex detection to evaluate plasma neutrophil extracellular traps of patients with severe influenza A (H1N1)

Xiaoyu Yang¹, yue Zhang², Weili Mai¹, Rui Li², Liuluan Zhu³, Junyan Han², Hui Zeng³^,^†()

^1. Peking University Ditan Teaching Hospital, Beijing 100015, China
^2. Institute of Infectious Diseases, Beijing Ditan Hospital, Capital Medical University, Beijing 100015, China; Beijing Key Laboratory of Emerging Infectious Diseases, Beijing 100015, China
^3. Peking University Ditan Teaching Hospital, Beijing 100015, China; Institute of Infectious Diseases, Beijing Ditan Hospital, Capital Medical University, Beijing 100015, China; Beijing Key Laboratory of Emerging Infectious Diseases, Beijing 100015, China

Received:2018-10-19 Published:2019-04-15
Corresponding author: Hui Zeng
About author:
Corresponding author: Zeng Hui, Email: zenghui@ccmu.edu.cn

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引用本文：

杨晓宇, 张玥, 麦维利, 李蕊, 朱鏐娈, 韩俊燕, 曾辉. 乳铁蛋白-DNA复合物检测评价甲型H1N1重症流感患者血浆中性粒细胞胞外诱捕网水平[J]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2019, 13(02): 122-127.

Xiaoyu Yang, yue Zhang, Weili Mai, Rui Li, Liuluan Zhu, Junyan Han, Hui Zeng. Lactoferrin-DNA complex detection to evaluate plasma neutrophil extracellular traps of patients with severe influenza A (H1N1)[J]. Chinese Journal of Experimental and Clinical Infectious Diseases(Electronic Edition), 2019, 13(02): 122-127.

目的

建立乳铁蛋白-DNA复合物的相对定量检测方法，评价甲型H1N1重型流感及其他病原体感染者血浆样本中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的含量。

方法

将DNA含量明确的血浆样本进行梯度稀释作为标准品，应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中乳铁蛋白-DNA复合物含量。采用乳铁蛋白-DNA ELISA方法比较19例甲型H1N1重症流感患者与19例献血者（对照组）血浆乳铁蛋白-DNA复合物含量差异。

结果

甲型H1N1重型重症流感患者血浆中乳铁蛋白-DNA复合物水平与游离DNA（cfDNA）和组蛋白-DNA复合物水平均呈正相关（r = 0.6763、P < 0.0001，r = 0.7560、P < 0.0001）。甲型H1N1重症流感患者血浆中乳铁蛋白-DNA复合物含量为[2.082（1.169，5.021）μg/ml]，显著高于对照组[0.233（0.170，0.376）μg/ml]，差异有统计学意义（P < 0.0001），且乳铁蛋白-DNA复合物含量与甲型H1N1重症流感患者的急性生理与慢性健康评分（APACHEⅡ评分）呈正相关（r = 0.7379、P = 0.0005）。

结论

血浆乳铁蛋白-DNA复合物含量可用于评价甲型H1N1重症流感患者NETs水平。

关键词: 甲型H1N1重型流感, 乳铁蛋白-DNA复合物, 中性粒细胞胞外诱捕网, 酶联免疫吸附法

Objective

To establish a relative quantitative assay for lactoferrin-DNA complex, and to assess the levels of neutrophil extracellular traps (NETs)in plasma samples from patients with severe influenza A (H1N1) and other pathogen infectious diseases.

Methods

Plasma samples with clear DNA content were serially diluted as a standard, and the level of lactoferrin-DNA complex in plasma was determined by Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The lactoferrin-DNA ELISA method was used to compare the difference of plasma lactoferrin-DNA complex between 19 patients with severe influenza A (H1N1) and 19 blood donors (control group).

Results

Level of plasma lactoferrin-DNA complex of patients in severe influenza A (H1N1) was positively correlated with that of cfDNA (cell-free DNA) and histone-DNA complex, respectively (r = 0.6763, P < 0.0001; r = 0.756, P < 0.0001). The plasma lactoferrin-DNA complex content in patients with severe influenza A (H1N1) was 2.082 (1.169, 5.021) μg/ml, which was significantly higher than that of the controls [0.233 (0.170, 0.376) μg/ml, P < 0.0001], and positively correlated with Acute Physiological and Chronic Health Evaluation Ⅱ score (APACHE Ⅱ score) (r = 0.7379, P = 0.0005).

Conclusion

Plasma lactoferrin-DNA complex level could be used to assess NETs level in patients with severe influenza A (H1N1).

Key words: Severe influenza A (H1N1), Lactoferrin-DNA complex, Neutrophil extracellular traps, Enzyme-linked immunosorbent assay

表1 对照组和甲型H1N1重症流感患者的临床资料

临床资料		对照组（19例）	甲型H1N1重症流感患者（19例）	统计量	P值
年龄（岁）^a		37（31，65）	33（25，69）	Z =－1.125	0.261
男性[例（%）]		10（52.6）	12（63.2）	χ² = 0.432	0.511
基础疾病[例（%）]		?	?	?	?
?	呼吸系统疾病	1（5.3）	1（5.3）	χ² = 0.000	1.000
?	高血压	2（10.5）	7（36.8）	χ² = 2.330	0.127
?	糖尿病	0（0.0）	5（26.3）	χ² = 3.683	0.055
?	心脏病	0（0.0）	2（10.5）	χ² = 0.528	0.468
?	自身免疫性疾病	1（5.3）	0（0.0）	χ² = 0.000	1.000
?	肝脏疾病	0（0.0）	1（5.3）	χ² = 0.000	1.000
?	妊娠	0（0.0）	0（0.0）	—	—
病原微生物培养阳性[例（%）]		?	?	?	?
?	细菌	0（0.0）	10（52.6）	χ² = 10.993	0.001
?	真菌	0（0.0）	4（21.1）	χ² = 2.515	0.113
?	细菌和真菌	0（0.0）	2（10.5）	χ² = 0.528	0.468
住院时间^a		0（0，0）	8（4，13）	—	—
入院前发热天数^a		0（0，0）	3（2，7）	—	—
抗病毒治疗[例（%）]		0（0.0）	19（100.0）	χ² = 34.105	< 0.001
抗菌药物治疗[例（%）]		0（0.0）	19（100.0）	χ² = 34.105	0
糖皮质激素治疗[例（%）]		0（0.0）	5（26.3）	χ² = 3.683	0.055
免疫调节治疗[例（%）]		0（0.0）	0（0.0）	—	—
中性粒细胞计数（× 10⁹/L）^a		3.1（2.9，3.6）	8.5（4.2，16.9）	Z =－4.306	< 0.001
APACHE Ⅱ评分^a		—	12（8，17）	—	—
SOFA评分^a		—	8（4，9）	—	—

表1 对照组和甲型H1N1重症流感患者的临床资料

临床资料		对照组（19例）	甲型H1N1重症流感患者（19例）	统计量	P值
年龄（岁）^a		37（31，65）	33（25，69）	Z =－1.125	0.261
男性[例（%）]		10（52.6）	12（63.2）	χ² = 0.432	0.511
基础疾病[例（%）]		?	?	?	?
?	呼吸系统疾病	1（5.3）	1（5.3）	χ² = 0.000	1.000
?	高血压	2（10.5）	7（36.8）	χ² = 2.330	0.127
?	糖尿病	0（0.0）	5（26.3）	χ² = 3.683	0.055
?	心脏病	0（0.0）	2（10.5）	χ² = 0.528	0.468
?	自身免疫性疾病	1（5.3）	0（0.0）	χ² = 0.000	1.000
?	肝脏疾病	0（0.0）	1（5.3）	χ² = 0.000	1.000
?	妊娠	0（0.0）	0（0.0）	—	—
病原微生物培养阳性[例（%）]		?	?	?	?
?	细菌	0（0.0）	10（52.6）	χ² = 10.993	0.001
?	真菌	0（0.0）	4（21.1）	χ² = 2.515	0.113
?	细菌和真菌	0（0.0）	2（10.5）	χ² = 0.528	0.468
住院时间^a		0（0，0）	8（4，13）	—	—
入院前发热天数^a		0（0，0）	3（2，7）	—	—
抗病毒治疗[例（%）]		0（0.0）	19（100.0）	χ² = 34.105	< 0.001
抗菌药物治疗[例（%）]		0（0.0）	19（100.0）	χ² = 34.105	0
糖皮质激素治疗[例（%）]		0（0.0）	5（26.3）	χ² = 3.683	0.055
免疫调节治疗[例（%）]		0（0.0）	0（0.0）	—	—
中性粒细胞计数（× 10⁹/L）^a		3.1（2.9，3.6）	8.5（4.2，16.9）	Z =－4.306	< 0.001
APACHE Ⅱ评分^a		—	12（8，17）	—	—
SOFA评分^a		—	8（4，9）	—	—

图1 乳铁蛋白-DNA ELISA检测方法的标准曲线

图2 各种NETs检测方法间的相关性分析

图3 血浆乳铁蛋白-DNA复合物含量与疾病程度间的相关性

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