乙型肝炎病毒逆转录酶区耐药突变对血清乙型肝炎病毒表面抗原水平的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2023.05.006

目的

探讨乙型肝炎病毒（HBV）逆转录酶区（RT）耐药突变对血清HBV表面抗原（HBsAg）水平的影响。

方法

采用聚合酶链反应（PCR）产物直接测序法分析2016年1月至2021年12月于联勤保障部队第九一〇医院感染科接受核苷（酸）类药物（NAs）治疗的402例慢性乙型肝炎（CHB）患者RT区序列，根据RT区耐药突变情况分为HBV RT野生组（181例）和HBV RT耐药突变组（221例，其中A181突变患者33例、V191突变患者15例、L180 + M204V突变患者82例、M204I突变患者91例）。采用非参数秩和检验（Mann-Whitney U）探讨血清HBsAg水平的影响因素及HBV RT区耐药突变对血清HBsAg水平的影响；采用Spearman相关性分析探讨HBV RT耐药突变组血清HBsAg与HBV DNA相关性。

结果

入组402例CHB病例中，HBV RT野生组患者血清HBsAg、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）B型基因所占比例显著高于HBV RT耐药突变组，差异均有统计学意义（Z =－3.426、P = 0.001，Z =－2.347、P = 0.019，Z =－2.532、P = 0.011，Z =－10.387、P = 0.001）。HBV RT耐药突变组患者中，A181突变组、V191突变组、L180 + M204V突变组、M204I耐药突变组血清HBsAg水平均显著低于HBV RT野生组（Z = 2.475、P = 0.013，Z = 2.148、P = 0.032，Z = 2.115、P = 0.034，Z = 2.449、P = 0.014）。HBV DNA水平在各突变组间两两比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）。血清HBsAg水平与HBV DNA载量在A181突变组、L180M + M204V突变组和M204I突变组中均呈显著正相关性（r = 0.486、P = 0.004，r = 0.578、P < 0.001，r = 0.369、P < 0.001）。

结论

HBV RT区A181、V191、L180及M204V位点突变显著降低了CHB患者血清HBsAg水平。

关键词: 肝炎，乙型, 逆转录酶区, 耐药突变, 乙型肝炎病毒表面抗原, 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸

Objective

To investigate the effect of drug-resistant mutations in the reverse transcriptase region (RT) of hepatitis B virus (HBV) on serum hepatitis B surface antigen (HBsAg) level.

Methods

HBV DNA RT region was sequenced from 402 patients with chronic hepatitis B (CHB) who received nucleos(t)ide analogues drug treatment in Infectious Diseases Department of the 910th Joint Logistic Support Unit of the People’s Liberation Army of China from January 2016 to December 2021 by direct sequencing. According to the resistance mutation in RT region, the patients were divided into HBV RT wild group (181 cases) and HBV RT resistant mutation group (221 cases, including 33 cases with A181 mutation, 15 cases with V191 mutation, 82 cases with L180 + M204V mutation and 91 cases with M204I mutation). The influence factors of serum HBsAg level and the impact of HBV RT region resistance mutations on serum HBsAg level were analyzed by non parametric rank sum test (Mann Whitney U). The correlation between serum HBsAg level and HBV DNA in HBV RT resistant mutation group was explored by Spearman correlation analysis.

Results

The levels of serum HBsAg, ALT, AST and HBV genotype B infected patients in HBV RT wild group were significantly higher than those in HBV RT resistant mutation group (Z = -3.426, P = 0.001; Z =-2.347, P = 0.019; Z =-2.532, P = 0.011; Z =-10.387, P = 0.001). Among patients with HBV RT resistant mutation, serum HBsAg level in A181 mutation group, V191 mutation group, L180 + M204V mutation group, and M204I mutation group were significantly lower than those in HBV RT wild group (Z = 2.475, P = 0.013; Z = 2.148, P = 0.032; Z = 2.115, P = 0.034; Z = 2.449, P = 0.014). There was no significant difference in HBV DNA level among the mutation groups (all P > 0.05). Serum HBsAg level were significantly positively correlated with HBV DNA load in A181 mutation group, L180M + M204V mutation group and M204I mutation group (r = 0.486, P = 0.004; r = 0.578, P < 0.001; r = 0.369, P < 0.001).

Conclusion

HBV RT region drug resistance mutation in site of A181, V191, L180 and M204V had negative effect on serum HBsAg level of patients with CHB.

Key words: Hepatitis B virus, Reverse transcriptase region, Drug resistance mutation, Hepatitis B surface antigen, Hepatitis B virus deoxyribonucleic acid

表1 402例CHB患者一般资料

指标	HBV RT野生组（181例）	HBV RT耐药突变组（221例）	统计量	P值
男性[例（%）]	152（84.0）	176（79.6）	χ² = 0.976^a	0.323
年龄[M（P25，P75），岁]	36.0（29，46）	39.0（31，47）	Z =－1.772	0.076
HBV DNA [M（P25，P75），IU/ml]	1.1 × 10⁵（8.8 × 10³，6.5 × 10⁶）	4.7 × 10⁵（2.6 × 10⁴, 3.5 × 10⁶）	Z =－1.222	0.222
HBsAg [M（P25，P75），IU/ml]	8 553.0（5 259.0，24 429.0）	7 541.0（5 091.0，16 412.8）	Z =－3.426	0.001
HBeAg（+）[例（%）]	141（77.9）	179（81.0）	χ² = 0.412^a	0.521
ALT [M（P25，P75），IU/ml]	86.8（30.4，274.9）	54.3（33.0，126.2）	Z =－2.347	0.019
AST [M（P25，P75），IU/ml]	54.0（25.8，135.9）	33.0（23.6，79.5）	Z =－2.532	0.011
基因型B [例（%）]	116（64.1）	105（47.5）	χ² = 10.387^a	0.001

表1 402例CHB患者一般资料

指标	HBV RT野生组（181例）	HBV RT耐药突变组（221例）	统计量	P值
男性[例（%）]	152（84.0）	176（79.6）	χ² = 0.976^a	0.323
年龄[M（P25，P75），岁]	36.0（29，46）	39.0（31，47）	Z =－1.772	0.076
HBV DNA [M（P25，P75），IU/ml]	1.1 × 10⁵（8.8 × 10³，6.5 × 10⁶）	4.7 × 10⁵（2.6 × 10⁴, 3.5 × 10⁶）	Z =－1.222	0.222
HBsAg [M（P25，P75），IU/ml]	8 553.0（5 259.0，24 429.0）	7 541.0（5 091.0，16 412.8）	Z =－3.426	0.001
HBeAg（+）[例（%）]	141（77.9）	179（81.0）	χ² = 0.412^a	0.521
ALT [M（P25，P75），IU/ml]	86.8（30.4，274.9）	54.3（33.0，126.2）	Z =－2.347	0.019
AST [M（P25，P75），IU/ml]	54.0（25.8，135.9）	33.0（23.6，79.5）	Z =－2.532	0.011
基因型B [例（%）]	116（64.1）	105（47.5）	χ² = 10.387^a	0.001

表2 HBV RT野生组和HBV RT耐药组患者NAs治疗方式

治疗方式	例数		治疗时间[M（P25，P75），月]		Z值	P值
治疗方式	HBV RT野生组（181例）	HBV RT突变组（221例）	HBV RT野生组（181例）	HBV RT突变组（221例）	Z值	P值
L-Nucleosides为起始药物
LAM	24	42	24.0（12.0，35.0）	33.0（14.0，50.0）	1.040	0.298
LDT	9	20	10.0（10.0，17.0）	219.0（11.8，27.0）	1.212	0.225
L-Nucleosides→ADV	29	31	55.0（20.8，99.3）	68.0（48.5，106.3）	1.320	0.187
L-Nucleosides→ETV	5	14	26.0（25.5，73.0）	39.0（38.0，72.0）	0.408	0.683
L-Nucleosides→ADV/ETV	2	5	56.0（37.5，100.5）	93.0（65.5，110.3）	0.800	0.424
ADV为起始药物
ADV	9	32	21.0（12.0，21.0）	28.0（15.0，56.0）	0.782	0.434
ADV→L-Nucleosides	10	7	44.0（23.8，65.0）	59.0（53.0，64.5）	0.959	0.337
ADV→ETV	12	3	33.0（24.0，37.5）	56.0（52.0，61.0）	1.757	0.079
ETV为起始药物
ETV	53	30	17.0（7.0，36.0）	44.0（26.8，59.5）	3.123	0.002
ETV→ADV	7	13	37.0（24.5，54.0）	39.0（38.0，72.0）	0.852	0.394
ETV→ L-Nucleosides	5	9	10.0（7.0，13.8）	59.0（36.0，60.0）	6.000	0.036
其他NAs为起始药物
LAM + ADV	14	10	34.0（12.0，63.0）	28.0（14.0，48.8）	0.194	0.846
ETV + ADV	2	5	28.0（21.5，32.5）	55.0（35.5，60.0）	0.577	0.564

表2 HBV RT野生组和HBV RT耐药组患者NAs治疗方式

治疗方式	例数		治疗时间[M（P25，P75），月]		Z值	P值
治疗方式	HBV RT野生组（181例）	HBV RT突变组（221例）	HBV RT野生组（181例）	HBV RT突变组（221例）	Z值	P值
L-Nucleosides为起始药物
LAM	24	42	24.0（12.0，35.0）	33.0（14.0，50.0）	1.040	0.298
LDT	9	20	10.0（10.0，17.0）	219.0（11.8，27.0）	1.212	0.225
L-Nucleosides→ADV	29	31	55.0（20.8，99.3）	68.0（48.5，106.3）	1.320	0.187
L-Nucleosides→ETV	5	14	26.0（25.5，73.0）	39.0（38.0，72.0）	0.408	0.683
L-Nucleosides→ADV/ETV	2	5	56.0（37.5，100.5）	93.0（65.5，110.3）	0.800	0.424
ADV为起始药物
ADV	9	32	21.0（12.0，21.0）	28.0（15.0，56.0）	0.782	0.434
ADV→L-Nucleosides	10	7	44.0（23.8，65.0）	59.0（53.0，64.5）	0.959	0.337
ADV→ETV	12	3	33.0（24.0，37.5）	56.0（52.0，61.0）	1.757	0.079
ETV为起始药物
ETV	53	30	17.0（7.0，36.0）	44.0（26.8，59.5）	3.123	0.002
ETV→ADV	7	13	37.0（24.5，54.0）	39.0（38.0，72.0）	0.852	0.394
ETV→ L-Nucleosides	5	9	10.0（7.0，13.8）	59.0（36.0，60.0）	6.000	0.036
其他NAs为起始药物
LAM + ADV	14	10	34.0（12.0，63.0）	28.0（14.0，48.8）	0.194	0.846
ETV + ADV	2	5	28.0（21.5，32.5）	55.0（35.5，60.0）	0.577	0.564

表3 402例CHB患者血清HBsAg水平

指标	例数	HBsAg[M（P25，P75），logIU/ml]	统计量	P值
性别			Z =－0.814	0.416
男	328	3.90（3.71，4.26）
女	74	3.94（3.72，4.33）
年龄（岁）			Z =－1.583	0.113
< 40	219	3.96（3.73，4.3）
≥ 40	183	3.90（3.73，4.28）
HBeAg			Z =－6.805	< 0.001
+	318	4.02（3.75，4.33）
－	84	3.77（3.55，3.87）
ALT（IU/ml）			Z =－0.635	0.525
≤ 40	122	3.93（3.68，4.31）
> 40	246	3.88（3.71，4.26）
AST（IU/ml）
≤ 40	176	3.91（3.69，4.27）	Z =－0.724	0.469
> 40	192	3.89（3.73，4.27）
HBV DNA（IU/ml）
≤ 10⁴	84	3.71（3.55，3.87）	H = 80.456	< 0.001
10⁴~10⁶	165	3.86（3.70，4.05）
≥ 10⁶	153	3.85（3.65，3.99）
基因型
B	221	3.92（3.73，4.27）	Z =－0.835	0.404
C	181	3.87（3.66，4.15）
突变类型
HBV RT野生	181	3.93（3.72，4.39）	Z =－2.142	0.032
HBV RT耐药突变	221	3.88（3.71，4.22）

表3 402例CHB患者血清HBsAg水平

指标	例数	HBsAg[M（P25，P75），logIU/ml]	统计量	P值
性别			Z =－0.814	0.416
男	328	3.90（3.71，4.26）
女	74	3.94（3.72，4.33）
年龄（岁）			Z =－1.583	0.113
< 40	219	3.96（3.73，4.3）
≥ 40	183	3.90（3.73，4.28）
HBeAg			Z =－6.805	< 0.001
+	318	4.02（3.75，4.33）
－	84	3.77（3.55，3.87）
ALT（IU/ml）			Z =－0.635	0.525
≤ 40	122	3.93（3.68，4.31）
> 40	246	3.88（3.71，4.26）
AST（IU/ml）
≤ 40	176	3.91（3.69，4.27）	Z =－0.724	0.469
> 40	192	3.89（3.73，4.27）
HBV DNA（IU/ml）
≤ 10⁴	84	3.71（3.55，3.87）	H = 80.456	< 0.001
10⁴~10⁶	165	3.86（3.70，4.05）
≥ 10⁶	153	3.85（3.65，3.99）
基因型
B	221	3.92（3.73，4.27）	Z =－0.835	0.404
C	181	3.87（3.66，4.15）
突变类型
HBV RT野生	181	3.93（3.72，4.39）	Z =－2.142	0.032
HBV RT耐药突变	221	3.88（3.71，4.22）

图1 不同组患者血清HBsAg水平和HBV DNA载量注：图A~B：血清HBsAg及HBV DNA在HBV RT野生组及各突变组的水平；图C~D：HBV RT野生组、A181、L180 + M204V、M204I突变组血清HBsAg在不同HBV DNA载量、不同HBeAg状态分组中的水平

图2 HBV RT耐药突变组患者血清HBsAg水平与HBV DNA载量相关性

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Effect of drug-resistant mutations in reverse transcriptase region of hepatitis B virus on the level of serum hepatitis B surface antigen

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