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中华实验和临床感染病杂志(电子版)

中华实验和临床感染病杂志(电子版) ›› 2023, Vol. 17 ›› Issue (01) : 24 -31. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2023.01.005

论著

宏基因组二代测序在获得性免疫缺陷综合征合并中枢神经系统感染中的临床应用
李倩1, 邓莉平1, 陈果1, 张忠威1, 莫平征1, 胡文佳1, 陈良君2, 张捷3, 张永喜1, 杨蓉蓉1, 熊勇1,†()   
  1. 1. 430071　武汉市，武汉大学中南医院感染科
    2. 430071　武汉市，武汉大学中南医院检验科
    3. 430071　武汉市，武汉大学中南医院脑外科
  • 收稿日期:2022-08-21 出版日期:2023-02-15
  • 通信作者: 熊勇
  • 基金资助:
    2020年湖北省重点研发计划项目(No. 2020BCB025); 武汉大学中南医院学科培育项目(No. ZNXKPY2021021)

Clinical application of metagenomic next-generation sequencing in patients with acquired immune deficiency syndrome complicated with central nervous system infection

Qian LI1, Liping Deng1, Guo Chen1, Zhongwei Zhang1, Pingzheng Mo1, Wenjia Hu1, Liangjun Chen2, Jie Zhang3, Yongxi Zhang1, Rongrong Yang1, Yong Xiong1,†()   

  1. 1. Department of Infectious Diseases, Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan 430071, China
    2. Department of Clinicallaboratory, Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan 430071, China
    3. Department of Neurosurgery, Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan 430071, China
  • Received:2022-08-21 Published:2023-02-15
  • Corresponding author: Yong Xiong
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引用本文：

李倩, 邓莉平, 陈果, 张忠威, 莫平征, 胡文佳, 陈良君, 张捷, 张永喜, 杨蓉蓉, 熊勇. 宏基因组二代测序在获得性免疫缺陷综合征合并中枢神经系统感染中的临床应用[J]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2023, 17(01): 24-31.

Qian LI, Liping Deng, Guo Chen, Zhongwei Zhang, Pingzheng Mo, Wenjia Hu, Liangjun Chen, Jie Zhang, Yongxi Zhang, Rongrong Yang, Yong Xiong. Clinical application of metagenomic next-generation sequencing in patients with acquired immune deficiency syndrome complicated with central nervous system infection[J]. Chinese Journal of Experimental and Clinical Infectious Diseases(Electronic Edition), 2023, 17(01): 24-31.

目的

评价脑脊液宏基因组二代测序（mNGS）在获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者合并中枢神经系统（CNS）感染诊断中的临床应用价值，了解AIDS患者合并CNS感染的病原谱。

方法

收集2021年1月至2022年8月于武汉大学中南医院收治并诊断为AIDS合并CNS感染者的临床资料、mNGS与常规病原检测法检出的病原体信息。比较常规病原学检测与mNGS检出病原体情况，与临床诊断进行一致性评价。

结果

61例诊断为AIDS合并CNS感染者中，经mNGS联合常规病原学检测后60例（98.4%、60/61）患者明确病原学诊断，与单独常规病原学检测阳性率（49.2%、30/61）以及单独mNGS阳性率（83.6%、51/61）差异均具有统计学意义（χ2 = 38.125、P < 0.001，χ2 = 8.093、P = 0.004）。mNGS阳性患者51例（83.6%），高于常规病原体检测阳性30例（49.2%），差异具有统计学意义（χ2 = 16.201、P < 0.001）。其中mNGS方法结果中两种及以上的病原体同时检出率为41.0%（25/61），高于常规病原检测法[9.8%（6/61）]，差异具有统计学意义（χ2 = 15.612、P < 0.001）。在隐球菌脑膜炎检出率中，常规检测方法[14.8%（9/61）]与mNGS检测方法[13.1%（8/61）]具有良好一致性，其中前者与临床诊断的一致性为90%（9/10），后者为80%（8/10）；43例（70.5%）患者至少检出1种病毒，其中24例（39.3%）患者检出人疱疹病毒4型（EB病毒），15例（24.6%）患者检出人疱疹病毒5型（CMV），8例（13.1%）患者检出JC多瘤病毒。14例（23.0%）患者中共检出18株真菌，包括新型隐球菌8株、似平滑念珠菌3株、曲霉菌4株、马尔尼菲篮状菌、耶氏肺胞子菌及尖端赛多孢子菌各1株；非典型病原体8例（13.1%），包括刚地弓形虫3例、苍白密螺旋体3例、军团菌、猫立克次体各1例；结核及非结核分支杆菌各2例（6.6%）。61例患者中，3例死亡，病死率为4.9%（3/61）。

结论

AIDS晚期患者合并CNS感染中混合感染常见，病原谱依次包括病毒、真菌、细菌和非典型病原体等。mNGS联合常规病原学检测可显著提高颅内感染的病原检出率，有助于及时精准诊疗，提高患者生存率。

关键词: 宏基因组二代测序, 获得性免疫缺陷综合征, 人类免疫缺陷病毒, 病原学检测, 中枢神经系统感染, 病原谱
Objective

To evaluate the clinical value of metagenomic next-generation sequencing (mNGS) of cerebrospinal fluid in acquired immune deficiency syndrome (AIDS)? complicated with central nervous system (CNS) infection, and to investigate the pathogetic spectrum.

Methods

AIDS patients complicated with CNS infection in Zhongnan Hospital of Wuhan University from January 2021 to August 2022 were analyzed, including the clinical characteristics and pathogen information detected by mNGS and routine etiological examination. The pathogens detected by routine etiological examination and mNGS were compared, and the consistency with clinical diagnosis was evaluated.

Results

Among the 61 patients with CNS infection, 60 patients (98.4%, 60/61) were identified by mNGS combined with routine etiological examination, which was significantly higher than that of routine etiological examination alone (49.2%, 30/61) and that of mNGS alone (83.6%, 51/61), with significant differences (χ2 = 38.125, P < 0.001; χ2 = 8.093, P = 0.004). The positive rate of mNGS 83.6% (51/61) was significantly higher than that of routine etiological examination [49.2% (30/61)], with significant difference (χ2 = 16.201, P < 0.001). The detection rate of two or more pathogens by mNGS was 41.0% (25/61), which was significantly higher than that by routine etiological examination (9.8%, 6/61), with significant difference (χ2 = 15.612, P < 0.001). For the detection rate of cryptococcal meningitis, conventional detection method [14.8% (9/61)] was in good agreement with mNGS [13.1% (8/61)], and the consistency with clinical diagnosis were 90% (9/10) and 80% (8/10), respectively. At least one virus was detected in 43 (70.5%) patients, of which 24 (39.3%) cases detected human herpesvirus 4 (EBV), 15 (24.6%) cases detected human herpesvirus 5 (CMV), and 8 (13.1%) cases detected JC polyomavirus. Total of 18 strains of fungi were detected in 14 (23.0%) patients, including 8 strains of Cryptococcus neoformans, 4 strains of Aspergillus, 3 strains of Candida parapsilosis, 1 strain of Talaromyces marneffei, 1 strain of Pneumocystosis jirovecii and 1 strain of Dosporium apiospermum. There were 8 (13.1%) atypical pathogens detected, including 3 strains of Toxoplasma gondii, 3 strain of Treponema pallidum, 1 strain of Legionella and 1 strain of Rickettsia felis. Tuberculosis and non-tuberculous mycobacterium were detected in 2 (6.6%) cases respectively. Total of 3 cases died, the mortality rate was 4.9% (3/61).

Conclusions

Mixed infections are common in advanced AIDS patients complicated with CNS infection, and the pathogetic spectrum includes virus, fungi, bacterial and atypical pathogens. mNGS combined with routine etiological examination could significantly improve the rapid pathogen detection rate of intracranial infections and the survival rate of patients.

Key words: Metagenomic next-generation sequencing, Acquired immune deficiency syndrome, Human immunodeficiency virus, Etiological examination, Central nervous systerm infection, Pathogetic spectrum
表1 61例AIDS合并中枢神经系统感染者的临床表现
症状 例（%）
头晕头痛 33（54.1）
发热 31（50.8）
恶心呕吐 20（32.8）
四肢乏力伴行动障碍 17（27.9）
视力模糊 9（14.8）
意识障碍 7（11.5）
言语障碍 4（6.6）
呼吸困难 3（4.9）
癫痫发作 3（4.9）
表2 61例AIDS合并中枢神经系统感染者常规实验室检测指标
指标 数值
外周血CD4+ T淋巴计数[M（P25，P75），个/μl] 29（10，166）
CD4+ T细胞< 200.0个/μl [例（%）] 51（83.6）
外周血Lg HIV-VL 4.6（4.0，5.3）
外周血病原学指标[例（%）]  
CMV DNA（+） 19（31.1）
EB DNA（+） 29（47.5）
1，3-真菌D葡聚糖（+） 14（23.0）
CSF有核细胞数[M（P25，P75），个/μl] 6（2，30）
CSF有核细胞> 8.0个/μl [例（%）] 28（45.9）
CSF生化  
葡萄糖[M（P25，P75），mmol/L] 2.8（2.3，3.3）
葡萄糖< 2.5 mmol/L [例（%）] 19（31.1）
蛋白[M（P25，P75），g/L] 0.7（0.5，1.1）
蛋白> 0.4 g/L [例（%）] 48（78.7）
氯化物（ ± s，mmol/L） 122.5 ± 5.5
氯化物< 120.0 mmol/L [例（%）] 14（23.0）
CSF常规病原学检测[例（%）]  
CMV DNA（+） 7（11.5）
EB DNA（+） 18（29.5）
HSV DNA（+） 0（0.0）
墨汁染色异常 4（6.6）
革兰染色异常 1（1.6）
抗酸染色异常 0（0.0）
CSF培养（+）[例（%）] 3（4.9）
结核DNA/X-pert（+）[例（%）] 2（3.3）
隐球菌抗原（+）[例（%）] 8（13.1）
表3 61例脑脊液mNGS检出病原体种类例数分布[例（%）]
种类数 mNGS 常规检测方法 联合检测
0 10（16.4） 31（50.8） 8（13.1）
1 26（42.6） 24（3.9） 24（39.3）
2 12（19.7） 6（9.8） 15（24.6）
3 10（16.4） 0（0.0） 11（18.0）
4 0（0.0） 0（0.0） 0（0.0）
5 1（1.6） 0（0.0） 1（1.6）
6 0（0.0） 0（0.0） 0（0.0）
7 2（3.3） 0（0.0） 2（3.3）
图1 mNGS与常规病原学检测注：采用独立样本卡方检验
表4 常规病原学检测、mNGS例与联合检测方法的病原体检出率[例（%）]
病原体检出 例数 常规病原学检测 mNGS 联合检测
病原体检出率 61 30（49.2） 51（83.6） 60（98.4）
2种及以上病原体检出率 61 6（9.8） 25（41.0） 29（47.5）
表5 mNGS、常规病原学检测与临床诊断隐球菌脑膜炎诊断中的敏感性和特异性
诊断方法 灵敏度 特异度 Kappa值 P值a
mNGS/临床诊断 80%（8/10） 100%（51/51） 1.0472 0.480
常规病原学检测/临床诊断 90%（9/10） 100%（51/51） 1.0588 > 0.999
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