两种病毒核酸提取方法在流行感冒诊断中的比较

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2017.05.010

中华实验和临床感染病杂志(电子版) ›› 2017, Vol. 11 ›› Issue (05) : 474 -478. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2017.05.010

临床论著

两种病毒核酸提取方法在流行感冒诊断中的比较

刘亚楠¹, 李珺², 华文浩¹, 宋淑静¹, 马小亮¹, 董建平², 宋蕊³^,^†(

)

^1. 100015　北京，首都医科大学附属北京地坛医院检验科
^2. 100083　北京，北京市海淀医院（北京大学第三医院海淀院区）感染科
^3. 100015　北京，首都医科大学附属北京地坛医院感染科

收稿日期:2016-12-27 出版日期:2017-10-15
通信作者: 宋蕊
基金资助:
首都医学发展科研专项项目(No. 2014-4-2175)

Comparison of two nucleic acid extraction methods in detecting influenza

Ya’nan Liu¹, Jun Li², Wenhao Hua¹, Shujing Song¹, Xiaoliang Ma¹, Jianping Dong², Rui Song³^,^†()

^1. Department of Clinical Laboratory, Beijing Ditan Hospital, Capital Medical University, Beijing 100015, China
^2. Department of Infectious Diseases, Beijing Haidian Hospital, Bejing Haidian Section of Peking University Third Hospital, Beijing 100083, China
^3. Department of Infectious Diseases, Beijing Ditan Hospital, Capital Medical University, Beijing 100015, China

Received:2016-12-27 Published:2017-10-15
Corresponding author: Rui Song

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引用本文：

刘亚楠, 李珺, 华文浩, 宋淑静, 马小亮, 董建平, 宋蕊. 两种病毒核酸提取方法在流行感冒诊断中的比较[J]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2017, 11(05): 474-478.

Ya’nan Liu, Jun Li, Wenhao Hua, Shujing Song, Xiaoliang Ma, Jianping Dong, Rui Song. Comparison of two nucleic acid extraction methods in detecting influenza[J]. Chinese Journal of Experimental and Clinical Infectious Diseases(Electronic Edition), 2017, 11(05): 474-478.

目的

探讨离心柱法与Trizol法在流感病毒核酸提取中的差异，以找到提高阳性检出率的方法。

方法

对592例临床流行感冒（流感）疑似患者采集咽拭子标本，采用离心柱法与Trizol法分别提取病毒核酸，采用巢式PCR进行扩增，扩增产物行1%琼脂糖凝胶电泳，以2 000 bp Marker为标准，在564 bp区域出现阳性条带者为流感阳性。

结果

592例临床流感疑似患者咽拭子标本中，应用离心柱法提取核酸222例（37.5%）阳性，甲型流感患者212例，乙型流感患者10例。Trizol法提取核酸显示66例（11.1%）患者呈阳性，其中甲型和乙型流感患者分别为63例和3例。自2014年12月至2015年4月，北京地区流感病毒流行以甲型流感病毒为主，乙型流感病例较少。流感的发病与季节相关，集中暴发时期在12月份左右，高发感染人群的年龄段为21～40岁，与性别无关。在病毒提取效率上，离心柱法阳性率显著高于Trizol法，差异具有统计学意义（χ² = 111.66，P < 0.01）。

结论

北京地区流感病毒的流行以甲型流感为主。离心柱法提取核酸效率要高于Trizol法，有利于早期进行病原学诊断。

关键词: 流感病毒, 离心柱法, Trizol法, 核酸提取, 提取效率

Objective

To compare and evaluate the efficacy of the two different nucleic acid extraction methods for influenza determination.

Methods

There were 592 clinical suspected cases pharynx samples were collected. There were two methods were used to extract nucleic acid, such as column extraction and Trizol manual method. After extraction, RNA Nucleic acid were used in the RT-PCR and test with the electrophoresis. When there was a 564 bp marker positive, the sample would be sent to be tested.

Results

From December 2014 to April 2015, the influenza A was the main epidemic in Beijing; and less influenza B in Beijing. There were 66 (11.1%) Trizol positive while 222 (37.5%) positive for the column extraction.

Conclusions

The main epidemic influenza virus is the influenza A in Beijing. Column extraction is more efficient than the Trizol manual method. Use the column extraction, the diagnosis correction could be improved.

Key words: Influenza, Column extraction, Trizol manual method, Nucleic acid extraction

表1 第一轮PCR反应体系

试剂	剂量（μl）
Prime Seript 1 Step Enzyme Mix（酶）	0.4
2× 1 Step Buffer	5
Primer F1	0.3
Primer R1	0.3
RNase Free dH₂O	3
样本RNA	1

表1 第一轮PCR反应体系

试剂	剂量（μl）
Prime Seript 1 Step Enzyme Mix（酶）	0.4
2× 1 Step Buffer	5
Primer F1	0.3
Primer R1	0.3
RNase Free dH₂O	3
样本RNA	1

表2 第二轮PCR反应体系

试剂	剂量（μl）
Taq酶mix	15
Primer F2	1
Primer R2	1
RNase Free dH₂O	11
第一轮PCR扩增产物	2

表2 第二轮PCR反应体系

试剂	剂量（μl）
Taq酶mix	15
Primer F2	1
Primer R2	1
RNase Free dH₂O	11
第一轮PCR扩增产物	2

表3 两种方法特异性及灵敏度的比较

方法	真阳性（例）	真阴性（例）	假阳性（例）	假阴性（例）	灵敏度（%）	特异度（%）
离心柱法	222	370	0	0	100.0	100.0
Trizol法	66	370	0	156	29.7	100.0

表3 两种方法特异性及灵敏度的比较

方法	真阳性（例）	真阴性（例）	假阳性（例）	假阴性（例）	灵敏度（%）	特异度（%）
离心柱法	222	370	0	0	100.0	100.0
Trizol法	66	370	0	156	29.7	100.0

表4 甲型流感患者年龄季节分布（例）

时间	< 20岁		21～40岁		41～60岁		> 60岁		合计
时间	阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性
2014年12月	23	11	53	28	13	8	12	5	101	52
2015年1月	5	20	33	35	15	24	16	16	69	95
2015年2月	2	4	18	41	6	27	8	17	34	89
2015年3月	2	10	13	55	1	39	1	13	17	117
2015年4月	0	3	1	6	0	6	0	2	1	17
合计	32	48	118	165	35	104	37	53	222	370

表4 甲型流感患者年龄季节分布（例）

时间	< 20岁		21～40岁		41～60岁		> 60岁		合计
时间	阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性	阳性	阴性
2014年12月	23	11	53	28	13	8	12	5	101	52
2015年1月	5	20	33	35	15	24	16	16	69	95
2015年2月	2	4	18	41	6	27	8	17	34	89
2015年3月	2	10	13	55	1	39	1	13	17	117
2015年4月	0	3	1	6	0	6	0	2	1	17
合计	32	48	118	165	35	104	37	53	222	370

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