阴沟肠杆菌的临床分布及其产碳青霉烯酶研究

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2017.03.007

目的

探讨阴沟肠杆菌分离菌株的临床分布及其对常用抗菌药物的耐药及产碳青霉烯酶情况。

方法

收集2014年6月至2016年2月武汉大学人民医院298例患者分类标本培养的菌株，应用BD Phoenix^TM 100细菌鉴定及药敏系统鉴定菌种和药物敏感性，并适当补充K-B法药敏试验；对碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降的菌株进行Carba NP实验表型确证，并且进行PCR测序确定基因型；采用阴沟肠杆菌的MLST技术进行分子分型。

结果

共检出非重复分离的阴沟肠杆菌298株，其中标本主要为痰液（29.87%），其次为尿液（25.50%）。科室分布中，神经外科（17.79%）检出最多，其次为肝胆外科（12.75%）。阴沟肠杆菌对头孢唑林的耐药率最高（98.1%）、其次为氨苄西林（89.7%）；对碳青霉烯类抗菌药物耐药的菌株中，9株菌通过Carba NP实验检测，其中8株为阳性，1株为阴性。PCR扩增出4株产NDM-1基因的菌株，其中1株联合产VIM-19基因的菌株，一株单产VIM-19型基因，均经过测序比对验证。将4株产NDM-1碳青霉烯酶的细菌进行MLST分型，得到3个不同的ST型，分别为ST508，ST509和ST145。

结论

阴沟肠杆菌的耐药较为严峻，感控部门应加强对本地区产碳青霉烯酶菌的监测，以减少耐药菌的产生和播散。

关键词: 阴沟肠杆菌, 抗菌药物, 碳青霉烯酶

Objective

To investigate the clinical distribution of isolated Escherichia coli and its resistance to common antimicrobial agents and the production of carbapenemases.

Methods

Various strains of 298 patients from Wuhan University People’s Hospital from June 2014 to February 2016 were collected. The strains were identified by BD Phoenix^TM 100 bacterial identification and drug susceptibility system. On The strains of alkene antimicrobial with sensitivity decreasing to carbon penicillium were confirmed by Carba NP, genotypes were determined by PCR. The MLST technique of Enterobacter cloacae was applied for molecular typing.

Results

Total of 298 strains of Enterobacter cloacae were detected, among which the samples were mainly from sputum (29.87%), followed by urine (25.50%). In the departments distribution, neurosurgery (17.79%) was the most, followed by hepatobiliary surgery (12.75%). The resistance rate of Enterobacter cloacae to cefazolin was 98.1%, followed by ampicillin (89.7%). Among the strains resistant to carbapenem antibiotics, 9 strains were detected by Carba NP test, 8 of which were positive, one strain was negative. Four strains of NDM-1 gene were amplified by PCR. One strain carrying the VIM-19 gene and one carrying the VIM-19 gene alone were detected by sequencing. Four strains of NDM-1 carbapenem were classified by MLST, and 3 different ST types were obtained, which were ST508, ST509 and ST145, respectively.

Conclusions

Antibiotic resistance of Enterobacter cloacae was grim, infection control departments should strengthen the monitoring of carbapenem to reduce the emergence and spread of drug-resistant bacteria.

Key words: Enterobacter cloacae, Antibacterials, Carbapenemases

表1 5种主要碳青霉烯酶PCR引物信息

引物名称	引物序列（3′→5′）	煺火温度（℃）	产物长度（bp）	引物来源
KPC-F	TCGCTAAACTCGAACAGG	63	785	参考文献^[8]
KPC-R	TTACTGCCCGTTGACGCCCAATCC	63	785	参考文献^[8]
NDM-F	TTGGCCTTGCTGTCCTTG	60	89	参考文献^[8]
NDM-R	ACACCAGTGACAATATCACCG	60	89	参考文献^[8]
VIM-F	AAGTCCGTTAGCCCATTCCG	59	114	NCBI数据库在线设计
VIM-R	GCGATATGCGACCAAACACC	59	114	NCBI数据库在线设计
IMP-F	GGGCGTTGTTCCTAAACATGG	61	185	NCBI在线设计
IMP-R	TAAGCCACTCTATTCCGCCC	61	185	NCBI在线设计
OXA-F	TTGGTGGCATCGATTATCGG	60	743	参考文献^[9]
OXA-R	GAGCACTTCTTTTGTGATGGC	60	743	参考文献^[9]

表1 5种主要碳青霉烯酶PCR引物信息

引物名称	引物序列（3′→5′）	煺火温度（℃）	产物长度（bp）	引物来源
KPC-F	TCGCTAAACTCGAACAGG	63	785	参考文献^[8]
KPC-R	TTACTGCCCGTTGACGCCCAATCC	63	785	参考文献^[8]
NDM-F	TTGGCCTTGCTGTCCTTG	60	89	参考文献^[8]
NDM-R	ACACCAGTGACAATATCACCG	60	89	参考文献^[8]
VIM-F	AAGTCCGTTAGCCCATTCCG	59	114	NCBI数据库在线设计
VIM-R	GCGATATGCGACCAAACACC	59	114	NCBI数据库在线设计
IMP-F	GGGCGTTGTTCCTAAACATGG	61	185	NCBI在线设计
IMP-R	TAAGCCACTCTATTCCGCCC	61	185	NCBI在线设计
OXA-F	TTGGTGGCATCGATTATCGG	60	743	参考文献^[9]
OXA-R	GAGCACTTCTTTTGTGATGGC	60	743	参考文献^[9]

表2 阴沟肠杆菌标本类型的分布

标本类型	株数	构成比（%）
痰	89	29.87
尿	76	25.50
血液	37	12.42
引流液	33	11.07
胆汁	24	8.05
脓液	22	7.38
口内分泌物	10	3.36
腹水	9	3.02
导管尖端	4	1.34
其他	3	1.02
合计	298	100.00

表2 阴沟肠杆菌标本类型的分布

标本类型	株数	构成比（%）
痰	89	29.87
尿	76	25.50
血液	37	12.42
引流液	33	11.07
胆汁	24	8.05
脓液	22	7.38
口内分泌物	10	3.36
腹水	9	3.02
导管尖端	4	1.34
其他	3	1.02
合计	298	100.00

表3 所检出阴沟肠杆菌的科室分布

科室	株数	构成比（%）
神经外科	53	17.79
肝胆外科	38	12.75
泌尿外科	30	10.07
肿瘤科	26	8.72
神经内科	24	8.05
骨科	23	7.72
肾病内科	18	6.04
重症医学科	16	5.37
儿科	14	4.70
老年医学科	12	4.03
耳鼻喉科	8	2.68
胃肠外科	7	2.35
整形外科	7	2.35
呼吸内科	5	1.68
消化内科	4	1.34
心血管内科	3	1.01
心血管外科	3	1.01
胸外科	3	1.01
其他	4	1.36
合计	298	100.00

表3 所检出阴沟肠杆菌的科室分布

科室	株数	构成比（%）
神经外科	53	17.79
肝胆外科	38	12.75
泌尿外科	30	10.07
肿瘤科	26	8.72
神经内科	24	8.05
骨科	23	7.72
肾病内科	18	6.04
重症医学科	16	5.37
儿科	14	4.70
老年医学科	12	4.03
耳鼻喉科	8	2.68
胃肠外科	7	2.35
整形外科	7	2.35
呼吸内科	5	1.68
消化内科	4	1.34
心血管内科	3	1.01
心血管外科	3	1.01
胸外科	3	1.01
其他	4	1.36
合计	298	100.00

表4 阴沟肠杆菌对常用抗菌药物的耐药情况

抗菌药物	R		I		S
抗菌药物	株数	耐药率（%）	株数	中介率（%）	株数	敏感率（%）
AMP	267	89.7	16	5.4	15	4.9
PIP	144	48.4	18	5.9	136	45.7
AMC	274	91.9	3	0.9	21	7.2
TZP	74	24.9	29	9.8	195	65.3
SAM	172	57.8	46	15.6	79	26.6
CZO	292	98.1	0	0.0	0	0.0
CAZ	129	43.4	7	2.2	162	54.4
CTX	149	50.0	8	2.7	141	47.3
FEP	53	17.7	30	10.2	215	72.1
ATM	135	45.3	5	1.8	158	52.9
IPM	13	4.4	5	1.8	280	93.8
MEM	15	4.9	3	0.9	281	94.2
AMK	20	6.6	0	0.0	278	93.4
GEN	68	22.7	1	0.4	229	76.9
CIP	63	21.2	8	2.7	227	76.1
LEV	56	18.8	13	4.4	229	76.9
SXT	85	28.6	0	0.0	213	71.4
CHL	79	26.6	14	4.6	205	68.8

表4 阴沟肠杆菌对常用抗菌药物的耐药情况

抗菌药物	R		I		S
抗菌药物	株数	耐药率（%）	株数	中介率（%）	株数	敏感率（%）
AMP	267	89.7	16	5.4	15	4.9
PIP	144	48.4	18	5.9	136	45.7
AMC	274	91.9	3	0.9	21	7.2
TZP	74	24.9	29	9.8	195	65.3
SAM	172	57.8	46	15.6	79	26.6
CZO	292	98.1	0	0.0	0	0.0
CAZ	129	43.4	7	2.2	162	54.4
CTX	149	50.0	8	2.7	141	47.3
FEP	53	17.7	30	10.2	215	72.1
ATM	135	45.3	5	1.8	158	52.9
IPM	13	4.4	5	1.8	280	93.8
MEM	15	4.9	3	0.9	281	94.2
AMK	20	6.6	0	0.0	278	93.4
GEN	68	22.7	1	0.4	229	76.9
CIP	63	21.2	8	2.7	227	76.1
LEV	56	18.8	13	4.4	229	76.9
SXT	85	28.6	0	0.0	213	71.4
CHL	79	26.6	14	4.6	205	68.8

图1 KPC、IMP和OXA-48型酶的阴性结果

图2 NDM和VIM型酶的阳性结果

表5 MLST结果

样本号	dnaA	fusA	gyrB	leuS	pyrG	rplB	rpoB	ST
1	63	11	58	36	77	16	19	508
4	155	109	137	107	157	8	28	509
6	59	40	82	9	67	6	6	145
7	155	109	137	107	157	8	28	509

表5 MLST结果

样本号	dnaA	fusA	gyrB	leuS	pyrG	rplB	rpoB	ST
1	63	11	58	36	77	16	19	508
4	155	109	137	107	157	8	28	509
6	59	40	82	9	67	6	6	145
7	155	109	137	107	157	8	28	509

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Clinical distribution and carbapenemases research on Enterobacter cloacae

样本号	dnaA	fusA	gyrB	leuS	pyrG	rplB	rpoB	ST
1	63	11	58	36	77	16	19	508
4	155	109	137	107	157	8	28	509
6	59	40	82	9	67	6	6	145
7	155	109	137	107	157	8	28	509

样本号	dnaA	fusA	gyrB	leuS	pyrG	rplB	rpoB	ST
1	63	11	58	36	77	16	19	508
4	155	109	137	107	157	8	28	509
6	59	40	82	9	67	6	6	145
7	155	109	137	107	157	8	28	509

样本号	dnaA	fusA	gyrB	leuS	pyrG	rplB	rpoB	ST
1	63	11	58	36	77	16	19	508
4	155	109	137	107	157	8	28	509
6	59	40	82	9	67	6	6	145
7	155	109	137	107	157	8	28	509

样本号	dnaA	fusA	gyrB	leuS	pyrG	rplB	rpoB	ST
1	63	11	58	36	77	16	19	508
4	155	109	137	107	157	8	28	509
6	59	40	82	9	67	6	6	145
7	155	109	137	107	157	8	28	509

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Clinical distribution and carbapenemases research on Enterobacter cloacae

样本号	dnaA	fusA	gyrB	leuS	pyrG	rplB	rpoB	ST
1	63	11	58	36	77	16	19	508
4	155	109	137	107	157	8	28	509
6	59	40	82	9	67	6	6	145
7	155	109	137	107	157	8	28	509

样本号	dnaA	fusA	gyrB	leuS	pyrG	rplB	rpoB	ST
1	63	11	58	36	77	16	19	508
4	155	109	137	107	157	8	28	509
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