急性期恶性疟患者外周血PD-1<sup>+</sup>TIGIT<sup>+</sup> T细胞功能

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2021.06.005

目的

研究急性期恶性疟患者外周血T淋巴细胞共抑制分子PD-1和TIGIT的表达模式及功能。

方法

收集2019年4月至2019年10月首都医科大学附属北京地坛医院感染二科14例非洲输入型急性期恶性疟患者发病后4~12 d和28例健康对照者外周血单个核细胞。流式细胞术检测患者外周血CD4⁺ T和CD8⁺ T淋巴细胞PD-1^-TIGIT^-、PD-1⁺TIGIT^-、PD-1^-TIGIT⁺和PD-1⁺TIGIT⁺四个亚群比例，比较各细胞亚群凋亡（Annexin V⁺）、增殖（Ki67⁺）、分泌细胞因子（IFN-γ⁺、IL-2⁺和TNF-α⁺）和杀伤（Granzyme B⁺和Perforin⁺）能力差异，正态分布资料采用one-way ANOVA检验进行方差分析，Holm-Sidak’s进行多重比较；偏态分布资料则采用Kruskal-Wallis检验进行分析，Bonferroni法进行多重比较。统计患者临床资料并分析急性期恶性疟患者T细胞各亚群比例和CD8⁺ T细胞杀伤能力与临床指标的相关性，正态分布资料采用Pearson相关性分析，非正态分布资料采用Spearman相关性分析。

结果

与健康对照组相比，急性期恶性疟患者CD4⁺ T和CD8⁺ T细胞中PD-1⁺和PD-1⁺TIGIT⁺细胞比例均显著增高（CD4：t = 4.85、P < 0.001，t = 4.77、P = 0.0002；CD8：t = 3.90、P = 0.001、t = 3.29、P = 0.0021）；CD4⁺ T细胞TIGIT⁺亚群增加（t = 4.12、P = 0.0002）。CD4⁺ T细胞和CD8⁺ T细胞PD-1⁺TIGIT^-和PD-1⁺TIGIT⁺细胞亚群Annexin V⁺表达比例均显著高于PD-1^-TIGIT^-细胞亚群（F = 4.67、P = 0.0125，F = 3.19、P = 0.0460），但CD4⁺ T细胞PD-1⁺TIGIT^-和PD-1⁺TIGIT⁺细胞亚群Ki67⁺和IFN-γ⁺表达比例均显著高于PD-1^-TIGIT^-细胞亚群（H = 17.80、P = 0.0005，F = 11.22、P = 0.0002），CD8⁺ T细胞PD-1⁺TIGIT^-和PD-1⁺TIGIT⁺细胞亚群IFN-γ⁺、IL-2⁺和Granzyme B⁺表达比例均显著高于PD-1^-TIGIT^-细胞亚群（F = 7.95、P = 0.047，H = 8.29、P = 0.0404，F = 12.18、P < 0.001）。急性期恶性疟患者CD4⁺和CD8⁺ T细胞各亚群比例与患者临床参数相关性分析发现CD4⁺ T细胞PD-1⁺TIGIT⁺表达比例与RBC计数和HGB浓度呈负相关（r =-0.3861、P = 0.0116，r =-0.3980、P = 0.0091）。CD8⁺ T细胞杀伤能力与患者临床参数相关性分析发现CD8⁺ T细胞Granzyme B⁺和Perforin⁺表达比例与Cr浓度呈显著负相关（r =-0.4812、P = 0.0201，r =-0.6255、P = 0.0014）。

结论

急性期恶性疟患者外周血T细胞PD-1和TIGIT表达上调，仍具有较强的增殖、杀伤和分泌细胞因子的能力，并未表现出典型的T细胞耗竭表型。患者CD4⁺ T细胞PD-1⁺TIGIT⁺表达比例增高可能与机体严重的红细胞破坏和溶血有关，CD8⁺ T细胞Granzyme B⁺和Perforin⁺表达比例增高可能与肾脏功能损伤程度有关。

关键词: 恶性疟, 急性期, T淋巴细胞, 共抑制分子, 多色流式细胞术

Objective

To investigate the expression patterns and potential functions of PD-1 and TIGIT, two co-inhibitory molecules, on T lymphocyte cells in peripheral blood of patients with acute falciparum malaria infection.

Methods

Fourteen African imported patients with acute falciparum malaria in Infectious Diseases Department-Ⅱ of Beijing Ditan Hospital, Capital Medical University, from April to October 2019 were enrolled. Peripheral blood mononuclear cells at 4-12 d after symptom onset were collected, while 28 healthy were enrolled as controls. Flow cytometry was used to detect the proportions of four subsets (PD-1^-TIGIT^-, PD-1⁺TIGIT^-, PD-1^-TIGIT⁺ and PD-1⁺TIGIT⁺) of CD4⁺ T and CD8⁺ T cells in peripheral blood of patients, and the further expression level on apoptosis (Annexin V⁺), proliferation (Ki67⁺), cytokines secretion (IFN-γ⁺, IL-2⁺ and TNF-α⁺) and cytotoxicity (Granzyme B⁺ and Perforin⁺) in four subsets were compared, among which, variance analysis of normal distribution data were analyzed by one-way ANOVA test and multiple comparison were taken by holm-Sidak’s test. Skewness distribution data were analyzed by Kruskal-wallis test for variance analysis andmultiple comparison were taken by Bonferroni method. The clinical data of patients were collected, and correlations between the proportion of T cell subsets and clinical parameters as well as the cytotoxicity of CD8⁺ T cells and clinical parameters in patients with acute falciparum malaria were analyzed, among which, normal distribution data were analyzed by Pearson correlation analysis and skewness distribution data were analyzed by Spearman correlation analysis.

Results

Compared with healthy controls, the proportions of PD-1⁺ and PD-1⁺TIGIT⁺ subsets of CD4⁺ and CD8⁺ T cells in acute falciparum malaria patients were significantly increased (CD4: t = 4.85, P < 0.001; t = 4.77, P = 0.0002; CD8: t = 3.90, P = 0.001; t = 3.29, P = 0.0021). The proportion of TIGIT⁺ subsets of CD4⁺ T cells was increased (t = 4.12, P = 0.0002).The rates of Annexin V⁺ expressed by PD-1⁺TIGIT^- and PD-1⁺TIGIT⁺ subsets of CD4⁺ T cells and CD8⁺ T cells were significantly increased compared those of PD-1^-TIGIT^- subsets (F = 4.67, P = 0.0125; F = 3.19, P = 0.0460), but the rates of Ki67⁺ and IFN-γ⁺ expressed by PD-1⁺TIGIT^- and PD-1⁺TIGIT⁺ subsets of CD4⁺ T cells were significantly increased compared those of PD-1^-TIGIT^- subsets (H = 17.80, P = 0.0005; F = 11.22, P = 0.0002), and the rates of IFN-γ⁺ , IL-2⁺ and Granzyme B⁺ expressed by PD-1⁺TIGIT^-and PD-1⁺TIGIT⁺ subsets of CD8⁺ T cells were also significantly increased compared those of PD-1^-TIGIT^- subsets (F = 7.95, P = 0.0470; H = 8.29, P = 0.0404; F = 12.18, P < 0.001). Correlation analysis between the proportion of four subsets of T cells and clinical parameters showed a negative relationship between the proportion of PD-1⁺TIGIT⁺ subsets of CD4⁺ T cells and red blood cells count or hemoglobin concentration (r =-0.3861, P = 0.0116; r =-0.3980, P = 0.0091). Correlation analysis between the CD8⁺ T cells cytotoxic capacity and clinical parameters also showed the proportion of Granzyme B⁺ and Perforin⁺ subsets of CD8⁺ T cells were negatively correlated with the creatinine concentration (r =-0.4812, P = 0.0201; r =-0.6255, P = 0.0014).

Conclusions

In patients with acute falciparum malaria infection, the up-regulated expression of PD-1 and TIGIT induced T cells higher ability of proliferation, cytotoxic capacity and production of cytokines in peripheral blood, but they did not show typical T cells exhaustion phenotype. Moreover, the increased expression of PD-1⁺TIGIT⁺ subsets of CD4⁺ T cells may be related to severe red blood cells destruction and hemolysis, and the increased expression of Granzyme B⁺ and Perforin⁺ of CD4⁺ T cells may be related to the degree of renal function injury.

Key words: Plasmodium falciparum malaria, Acute phase, T lymphocyte cells, Co-inhibitory molecules, Multi-color flow cytometry

表1 健康对照者和急性期恶性疟患者的临床资料

参数		健康对照者（28例）	急性期恶性疟患者（14例）	统计量	P值
年龄（ ± s，岁）		38.93 ± 10.38	39.64 ± 9.24	t = 0.23	0.8218
性别（男/女，例）		12/2	12/2	-	1.0000^a
血细胞
	RBC（ ± s，× 10¹²/L）	4.55 ± 0.47	3.60 ± 0.95	t = 4.37	< 0.001
	HGB（ ± s，g/L）	132.80 ± 12.62	107.60 ± 26.17	t = 3.41	0.0035
	PLT（ ± s，× 10⁹/L）	228.70 ± 55.89	166.20 ± 112.50	t = 1.95	0.0679
肝肾功能
	BUN [M（P25，P75），mmol/L]	4.43（3.92，5.14）	3.70（2.98，9.21）	U = 177.00	0.6214^b
	Cr [M（P25，P75），µmol/L]	59.40（52.70，67.20）	72.55（62.23，142.20）	U = 98.00	0.0057^b
	ALT [M（P25，P75），U/L]	16.90（11.65，23.70）	70.60（47.68，162.80）	U = 38.00	< 0.001^b
	AST [M（P25，P75），U/L]	18.60（16.40，22.15）	50.80（41.28，72.78）	U = 33.00	< 0.001^b
TBil（ ± s，µmol/L）		11.01 ± 3.63	14.00（10.04，21.89）	U = 155.00	0.2806^b
DBil [M（P25，P75），µmol/L]		3.80（2.40，4.50）	6.95（4.20，15.85）	U = 65.00	0.002^b
其他指标
CRP（mg/L）		< 5	18.00（10.15，54.75）	-	-
PCT（ng/ml）		< 0.5	0.53（0.13，3.03）	-	-
ESR（ ± s，mm/h）		< 15	38.00 ± 39.47	-	-

表1 健康对照者和急性期恶性疟患者的临床资料

参数		健康对照者（28例）	急性期恶性疟患者（14例）	统计量	P值
年龄（ ± s，岁）		38.93 ± 10.38	39.64 ± 9.24	t = 0.23	0.8218
性别（男/女，例）		12/2	12/2	-	1.0000^a
血细胞
	RBC（ ± s，× 10¹²/L）	4.55 ± 0.47	3.60 ± 0.95	t = 4.37	< 0.001
	HGB（ ± s，g/L）	132.80 ± 12.62	107.60 ± 26.17	t = 3.41	0.0035
	PLT（ ± s，× 10⁹/L）	228.70 ± 55.89	166.20 ± 112.50	t = 1.95	0.0679
肝肾功能
	BUN [M（P25，P75），mmol/L]	4.43（3.92，5.14）	3.70（2.98，9.21）	U = 177.00	0.6214^b
	Cr [M（P25，P75），µmol/L]	59.40（52.70，67.20）	72.55（62.23，142.20）	U = 98.00	0.0057^b
	ALT [M（P25，P75），U/L]	16.90（11.65，23.70）	70.60（47.68，162.80）	U = 38.00	< 0.001^b
	AST [M（P25，P75），U/L]	18.60（16.40，22.15）	50.80（41.28，72.78）	U = 33.00	< 0.001^b
TBil（ ± s，µmol/L）		11.01 ± 3.63	14.00（10.04，21.89）	U = 155.00	0.2806^b
DBil [M（P25，P75），µmol/L]		3.80（2.40，4.50）	6.95（4.20，15.85）	U = 65.00	0.002^b
其他指标
CRP（mg/L）		< 5	18.00（10.15，54.75）	-	-
PCT（ng/ml）		< 0.5	0.53（0.13，3.03）	-	-
ESR（ ± s，mm/h）		< 15	38.00 ± 39.47	-	-

表2 健康对照者和急性期恶性疟患者T淋巴细胞表面共抑制分子PD-1和TIGIT表达比例

组别	例数	CD4⁺ T细胞（%）			CD8⁺ T细胞
组别	例数	PD-1⁺	TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺	PD-1⁺	TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺
健康对照者	28	10.14 ± 3.94	17.27 ± 4.92	5.08 ± 1.54	11.57 ± 4.74	34.75（28.13，44.3）	9.01 ± 3.97
急性期恶性疟患者	14	16.93 ± 4.88	24.70 ± 6.63	9.14 ± 2.99	20.03 ± 7.39	34.2（20.07，42.58）	13.78 ± 5.25
统计量		t = 4.85^a	t = 4.12^a	t = 4.77^a	t = 3.90^a	U = 161.00^b	t = 3.29^a
P值		0.0001	0.0002	0.0002	0.0010	0.3617	0.0021

表2 健康对照者和急性期恶性疟患者T淋巴细胞表面共抑制分子PD-1和TIGIT表达比例

组别	例数	CD4⁺ T细胞（%）			CD8⁺ T细胞
组别	例数	PD-1⁺	TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺	PD-1⁺	TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺
健康对照者	28	10.14 ± 3.94	17.27 ± 4.92	5.08 ± 1.54	11.57 ± 4.74	34.75（28.13，44.3）	9.01 ± 3.97
急性期恶性疟患者	14	16.93 ± 4.88	24.70 ± 6.63	9.14 ± 2.99	20.03 ± 7.39	34.2（20.07，42.58）	13.78 ± 5.25
统计量		t = 4.85^a	t = 4.12^a	t = 4.77^a	t = 3.90^a	U = 161.00^b	t = 3.29^a
P值		0.0001	0.0002	0.0002	0.0010	0.3617	0.0021

表3 急性期恶性疟患者CD4⁺ T细胞各亚群及功能表型比例（%）

指标	PD-1^-TIGIT^-	PD-1⁺TIGIT^-	PD-1^-TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺	统计量	P值
细胞比例	67.5 ± 6.7	7.79 ± 3.4	15.6 ± 4.5	9.1 ± 3.0	F = 529.30^a	< 0.001
Annexin V⁺	15.7 ± 6.5	41.1 ± 14.5	29.5 ± 12.6	31.9 ± 12.5	F = 4.67^a	0.0125
Ki67⁺	1.3（0.9，3.0）	16.5（13.7，34.2）	2.0（1.3，6.3）	19.2（14.9，27.1）	H = 17.80^b	0.0005
IFN-γ⁺	1.0 ± 0.3	5.8 ± 2.2	0.3 ± 0.4	3.7 ± 3.0	F = 11.22^a	0.0002
TNF-α⁺	5.5（1.8，6.8）	10.3（4.3，13.7）	1.6（0.8，2.5）	2.3（0.7，3.6）	H = 7.01^b	0.0490
IL-2⁺	0.6（0.4，4.1）	1.8（0.9，11.1）	2.5（1.6，4.2）	4.0（2.9，5.7）	H = 5.09^b	0.1656

表3 急性期恶性疟患者CD4⁺ T细胞各亚群及功能表型比例（%）

指标	PD-1^-TIGIT^-	PD-1⁺TIGIT^-	PD-1^-TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺	统计量	P值
细胞比例	67.5 ± 6.7	7.79 ± 3.4	15.6 ± 4.5	9.1 ± 3.0	F = 529.30^a	< 0.001
Annexin V⁺	15.7 ± 6.5	41.1 ± 14.5	29.5 ± 12.6	31.9 ± 12.5	F = 4.67^a	0.0125
Ki67⁺	1.3（0.9，3.0）	16.5（13.7，34.2）	2.0（1.3，6.3）	19.2（14.9，27.1）	H = 17.80^b	0.0005
IFN-γ⁺	1.0 ± 0.3	5.8 ± 2.2	0.3 ± 0.4	3.7 ± 3.0	F = 11.22^a	0.0002
TNF-α⁺	5.5（1.8，6.8）	10.3（4.3，13.7）	1.6（0.8，2.5）	2.3（0.7，3.6）	H = 7.01^b	0.0490
IL-2⁺	0.6（0.4，4.1）	1.8（0.9，11.1）	2.5（1.6，4.2）	4.0（2.9，5.7）	H = 5.09^b	0.1656

表4 急性期恶性疟患者CD8⁺ T细胞各亚群及功能表型比例（%）

指标	PD-1^-TIGIT^-	PD-1⁺TIGIT^-	PD-1^-TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺	统计量	P值
细胞比例	59.1（52.7，67.8）	5.0（2.9，7.0）	15.1（9.5，27.9）	12.6（10.3，18.8）	H = 41.03^a	< 0.001
Annexin V⁺	21.7 ± 9.2	45.1 ± 14.6	39.3 ± 17.2	43.4 ± 16.6	F = 3.19^b	0.0460
Ki67⁺	5.4 ± 5.1	22.2 ± 17.7	20.1 ± 14.3	28.3 ± 24.0	F = 2.04^b	0.1412
IFN-γ⁺	3.1 ± 2.6	11.2 ± 7.3	8.2 ± 4.1	7.6 ± 3.7	F = 7.95^b	0.0470
TNF-α⁺	1.6（0.8，8.6）	7.6（2.8，13.7）	6.6（2.3，12.6）	4.5（1.2，11.1）	H = 2.69^a	0.4425
IL-2⁺	0.5（0.3，2.3）	2.3（1.1，7.7）	3.4（2.1，6.4）	4.2（2.8，7.0）	H = 8.29^a	0.0404
Granzyme B⁺	13.5 ± 12.4	50.6 ± 26.2	66.1 ± 16.5	70.1 ± 14.1	F = 12.18^b	< 0.001
Perforin⁺	0.9（0.7，3.3）	5.1（1.4，15.4）	6.9（5.3，12.5）	6.3（2.6，16.3）	H = 6.72^a	0.0815

表4 急性期恶性疟患者CD8⁺ T细胞各亚群及功能表型比例（%）

指标	PD-1^-TIGIT^-	PD-1⁺TIGIT^-	PD-1^-TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺	统计量	P值
细胞比例	59.1（52.7，67.8）	5.0（2.9，7.0）	15.1（9.5，27.9）	12.6（10.3，18.8）	H = 41.03^a	< 0.001
Annexin V⁺	21.7 ± 9.2	45.1 ± 14.6	39.3 ± 17.2	43.4 ± 16.6	F = 3.19^b	0.0460
Ki67⁺	5.4 ± 5.1	22.2 ± 17.7	20.1 ± 14.3	28.3 ± 24.0	F = 2.04^b	0.1412
IFN-γ⁺	3.1 ± 2.6	11.2 ± 7.3	8.2 ± 4.1	7.6 ± 3.7	F = 7.95^b	0.0470
TNF-α⁺	1.6（0.8，8.6）	7.6（2.8，13.7）	6.6（2.3，12.6）	4.5（1.2，11.1）	H = 2.69^a	0.4425
IL-2⁺	0.5（0.3，2.3）	2.3（1.1，7.7）	3.4（2.1，6.4）	4.2（2.8，7.0）	H = 8.29^a	0.0404
Granzyme B⁺	13.5 ± 12.4	50.6 ± 26.2	66.1 ± 16.5	70.1 ± 14.1	F = 12.18^b	< 0.001
Perforin⁺	0.9（0.7，3.3）	5.1（1.4，15.4）	6.9（5.3，12.5）	6.3（2.6，16.3）	H = 6.72^a	0.0815

图1 患者CD4⁺ T细胞PD-1⁺TIGIT⁺表达比例与红细胞计数和血红蛋白浓度的相关性注：采用Pearson相关性分析，^*P<0.05、^**P<0.01

表5 急性期恶性疟患者T细胞各亚群比例与临床指标的相关性[r值（P值）]

指标	CD4⁺ T细胞亚群				CD8⁺ T细胞亚群
指标	PD-1^-TIGIT^-	PD-1⁺TIGIT^-	PD-1^-TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺	PD-1^-TIGIT^-	PD-1⁺TIGIT^-	PD-1^-TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺
RBC	0.2684（0.0857）	0.0765（0.6299）	-0.1082（0.4953）	-0.3861（0.0116）	0.1193（0.4516）	0.1315（0.4066）	-0.1591（0.3142）	-0.1265（0.4247）
HGB	0.2666（0.0879）	0.0928（0.5587）	-0.1207（0.4466）	-0.3980（0.0091）	0.1169（0.4611）	0.1460（0.3561）	-0.1982（0.2082）	-0.0382（0.8103）
CRP	-0.3740（0.0546）	0.1951（0.3295）	0.2350（0.2380）	0.3249（0.0982）	0.0382（0.8501）	0.2791（0.1586）	-0.1011（0.6160）	-0.2932（0.1378）
PCT	0.2210（0.3357）	0.0325（0.8888）	-0.1690（0.4640）	-0.0787（0.7347）	0.0858（0.7115）	-0.0488（0.8338）	-0.0182（0.9376）	-0.2715（0.2338）
ESR	-0.1824（0.5321）	-0.0418（0.8915）	0.1848（0.5244）	0.1473（0.6158）	-0.4286（0.1281）	0.0506（0.8676）	0.5165（0.0741）	0.2885（0.3147）
Cr	-0.1873（0.2472）	-0.2098（0.1939）	0.1029（0.5276）	-0.0483（0.7672）	-0.1995（0.2170）	0.0956（0.5573）	0.0848（0.6029）	0.0487（0.7654）
ALT	0.1964（0.2733）	-0.1641（0.3615）	-0.0271（0.8811）	-0.3353（0.0565）	-0.0702（0.6979）	0.0358（0.8434）	0.1414（0.4326）	-0.1611（0.3704）
AST	0.3062（0.0883）	-0.3013（0.0884）	-0.0652（0.7229）	-0.3478（0.0511）	-0.0213（0.9080）	-0.0749（0.6834）	0.2399（0.1859）	-0.3183（0.0759）
DBil	0.0156（0.9293）	0.3127（0.0674）	-0.1264（0.4695）	-0.1320（0.4498）	-0.2477（0.1515）	0.1938（0.2647）	0.2141（0.2169）	0.0310（0.8595）

表5 急性期恶性疟患者T细胞各亚群比例与临床指标的相关性[r值（P值）]

指标	CD4⁺ T细胞亚群				CD8⁺ T细胞亚群
指标	PD-1^-TIGIT^-	PD-1⁺TIGIT^-	PD-1^-TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺	PD-1^-TIGIT^-	PD-1⁺TIGIT^-	PD-1^-TIGIT⁺	PD-1⁺TIGIT⁺
RBC	0.2684（0.0857）	0.0765（0.6299）	-0.1082（0.4953）	-0.3861（0.0116）	0.1193（0.4516）	0.1315（0.4066）	-0.1591（0.3142）	-0.1265（0.4247）
HGB	0.2666（0.0879）	0.0928（0.5587）	-0.1207（0.4466）	-0.3980（0.0091）	0.1169（0.4611）	0.1460（0.3561）	-0.1982（0.2082）	-0.0382（0.8103）
CRP	-0.3740（0.0546）	0.1951（0.3295）	0.2350（0.2380）	0.3249（0.0982）	0.0382（0.8501）	0.2791（0.1586）	-0.1011（0.6160）	-0.2932（0.1378）
PCT	0.2210（0.3357）	0.0325（0.8888）	-0.1690（0.4640）	-0.0787（0.7347）	0.0858（0.7115）	-0.0488（0.8338）	-0.0182（0.9376）	-0.2715（0.2338）
ESR	-0.1824（0.5321）	-0.0418（0.8915）	0.1848（0.5244）	0.1473（0.6158）	-0.4286（0.1281）	0.0506（0.8676）	0.5165（0.0741）	0.2885（0.3147）
Cr	-0.1873（0.2472）	-0.2098（0.1939）	0.1029（0.5276）	-0.0483（0.7672）	-0.1995（0.2170）	0.0956（0.5573）	0.0848（0.6029）	0.0487（0.7654）
ALT	0.1964（0.2733）	-0.1641（0.3615）	-0.0271（0.8811）	-0.3353（0.0565）	-0.0702（0.6979）	0.0358（0.8434）	0.1414（0.4326）	-0.1611（0.3704）
AST	0.3062（0.0883）	-0.3013（0.0884）	-0.0652（0.7229）	-0.3478（0.0511）	-0.0213（0.9080）	-0.0749（0.6834）	0.2399（0.1859）	-0.3183（0.0759）
DBil	0.0156（0.9293）	0.3127（0.0674）	-0.1264（0.4695）	-0.1320（0.4498）	-0.2477（0.1515）	0.1938（0.2647）	0.2141（0.2169）	0.0310（0.8595）

图2 急性期恶性疟患者Granzyme B⁺CD8⁺ T细胞和Perforin⁺CD8⁺ T细胞比例与肌酐浓度的相关性注：均采用Spearman相关性分析，^*P < 0.05、^**P < 0.01

表6 急性期恶性疟患者CD8⁺ T细胞杀伤能力与临床指标的相关性

指标	Granzyme B⁺CD8⁺ T细胞			Perforin⁺CD8⁺ T细胞
指标	r值		P值	r值		P值
RBC	0.0226		0.9167	0.2080	0.3295
HGB	0.0079	0.9706		0.2370	0.2648
CRP	0.4126	0.1845		0.2378	0.4573
PCT	0.3604	0.4262		0.6667	0.1556
ESR	-0.4286	0.1281		0.8000	0.3333
Cr	-0.4812	0.0201		-0.6255	0.0014
ALT	0.2721	0.2897		-0.0750	0.7664
AST	0.1520	0.5594		0.3375	0.1708
DBil	-0.2487	0.3196		0.1476	0.5590

表6 急性期恶性疟患者CD8⁺ T细胞杀伤能力与临床指标的相关性

指标	Granzyme B⁺CD8⁺ T细胞			Perforin⁺CD8⁺ T细胞
指标	r值		P值	r值		P值
RBC	0.0226		0.9167	0.2080	0.3295
HGB	0.0079	0.9706		0.2370	0.2648
CRP	0.4126	0.1845		0.2378	0.4573
PCT	0.3604	0.4262		0.6667	0.1556
ESR	-0.4286	0.1281		0.8000	0.3333
Cr	-0.4812	0.0201		-0.6255	0.0014
ALT	0.2721	0.2897		-0.0750	0.7664
AST	0.1520	0.5594		0.3375	0.1708
DBil	-0.2487	0.3196		0.1476	0.5590

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Function of PD-1⁺TIGIT⁺ T cells in peripheral blood of falciparum malaria patients in acute phase

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