深圳市菌痢流行分子特征与对质粒介导的喹诺酮耐药机制

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1358.2016.03.007

目的

分析深圳市菌痢流行分子特征及对质粒介导的喹诺酮耐药机制。

方法

对2010年1月至2014年2月深圳市18家医院收集的临床标本进行分离培养与血清型鉴定，采用PCR方法检测质粒介导喹诺类耐药基因，采用琼脂倍比稀释法检测最低抑菌浓度（MIC），采用接合转移实验分析接合子类型与耐药性。

结果

血清学分布：126株志贺菌中，福氏志贺菌108株（87.51%），宋氏志贺菌16株（12.70%），福氏志贺菌优势血清型为Ⅳ C血清型42株（38.89%）；常用抗菌药物药敏情况分析：福氏志贺菌对萘啶酸（NAL）、头孢吡肟（FEP）、庆大霉素（GM）敏感性低于宋氏志贺菌，左氧氟沙星（LEV）、环丙沙星（GIP）、诺氟沙星（NOR）、头孢他啶（CAZ）、阿莫西林（AMC）敏感性高于宋氏志贺菌，差异均具有统计学意义（P均< 0.01）；扩增结果与序列分析：126株志贺菌中检出3株qnr基因（2.38%），4株aac6’基因（3.17%），1株qepA基因（0.78%）；最低抑菌浓度分析：与受体菌比较，接合子对萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、庆大酶素5种抗菌药物最低抑菌浓度提高2～32倍。

结论

深圳市志贺菌感染类型以福氏志贺菌与宋氏志贺菌为主，其中福氏志贺菌优势血清型为Ⅳ C血清型株；靶基因突变是导致喹诺酮类药物耐药的主要原因，不同类型志贺菌对喹诺酮类药物耐药性差异性较大。

关键词: 细菌性痢疾, 志贺菌, 质粒介导, 喹诺酮类, 耐药

Objective

To analyze the molecular characteristics of bacillary dysentery epidemic and the antibiotic resistance mechanisms of plasmid mediated quinolones in Shenzhen.

Methods

Clinical specimens were collected in 18 hospitals in Shenzhen form January 2010 to Febuary 2014 and isolation cultivation and serotype identification were applied. The plasmid mediated main type of quinolones genes were detected by PCR. Minimal inhibitory concentration (MIC) was tested by Agar dilution method. Transcojugants genotype and drug resistance were tested by joint transfer experiment.

Results

Serological distribution: during all 126 strains of Shigella, there were 108 (87.51%) strains of Shigella flexneri and 16 (12.70%) strains of Shigella sonnei. The superiority serotype of shigella flexneri was serum Ⅳ-C, with 42 strains counted for 38.89%. Commonly used antimicrobial susceptibility situation analysis: the sensitivity of Shigella flexneri to NAl, FEP and GM were significantly lower than that of Shigella sonnei, while the sensitivity of Shigella flexneri to LEV, GIP, NOR, CAZ and AMC were significantly higher than that of Shigella sonnei (P all < 0.05). Amplification results and sequence analysis: 3 (2.38%) cases with qnr genes, 4 cases with aac6’ genes, and 1 case with qepA genes were checked out in 126 strains Shigella. Minimum inhibitory concentration: compared with receptor bacteria, the MIC of transconjugants on NAL, GIP, LEV, NOR, GM were improved by 2-32 times.

Conclusions

The main types of Shigella infection in Shenzhen are Shigella flexneri and Shigella sonnei. The superiority serotype of shigella flexneri is Ⅳ-C. Target gene mutation is the main cause of quinolones resistance. The quinolones resistance of different types of shigella varies significantly.

Key words: Bacillary dysentery, Shigella, Plasmid mediated, Quinolones, Drug-resistance

表1 志贺菌质粒介导喹诺酮类耐药基因引物序列

引物名称	引物序列	退火温度（℃）	延伸时间（s）	产物长度（bp）
aac（6’）	F：TTGCGATGCTCTATGAGTGG	55	60	580
aac（6’）	R：CTCGAATGGCCTGGCGTGTTT	55	60	580
qepA	F：CGTGTTGCTGGAGTTCTTC	55	60	405
qepA	R：CTGCAGGTACTGCGTCATG	55	60	405
Qnr B4	F：ATCACCACCCGCACCT	50	60	242
Qnr B4	R：TCTAAATCGCCCAGTTCC	50	60	242
Qnr A	F：TCGGCAAAGGTCAGGTCACAGC	48	60	480
Qnr A	R：GCAAGAGGATTTCTCACGCCAGGAT	48	60	480

表1 志贺菌质粒介导喹诺酮类耐药基因引物序列

引物名称	引物序列	退火温度（℃）	延伸时间（s）	产物长度（bp）
aac（6’）	F：TTGCGATGCTCTATGAGTGG	55	60	580
aac（6’）	R：CTCGAATGGCCTGGCGTGTTT	55	60	580
qepA	F：CGTGTTGCTGGAGTTCTTC	55	60	405
qepA	R：CTGCAGGTACTGCGTCATG	55	60	405
Qnr B4	F：ATCACCACCCGCACCT	50	60	242
Qnr B4	R：TCTAAATCGCCCAGTTCC	50	60	242
Qnr A	F：TCGGCAAAGGTCAGGTCACAGC	48	60	480
Qnr A	R：GCAAGAGGATTTCTCACGCCAGGAT	48	60	480

表2 宋氏志贺菌与福氏志贺菌对常用抗菌药物药敏情况

抗菌药物	福氏志贺菌（n = 108）		宋氏志贺菌（n = 16）		χ²值	P值
抗菌药物	敏感株数	敏感率（%）	敏感株数	敏感率（%）	χ²值	P值
萘啶酸	13	12.04	7	43.75	10.361	< 0.01
左氧氟沙星	108	100.00	11	68.75	35.168	< 0.01
环丙沙星	97	89.81	7	43.75	21.859	< 0.01
诺氟沙星	108	100.00	7	43.75	65.504	< 0.01
氧氟沙星	107	99.07	7	43.75	57.528	< 0.01
头孢他啶	104	96.30	6	37.50	42.409	< 0.01
头孢吡肟	13	12.04	8	50.00	11.706	< 0.01
亚胺培南	108	100.00	16	100.00	—	—
阿莫西林	108	100.00	14	87.50	6.975	< 0.05
庆大霉素	6	5.56	12	75.00	48.706	< 0.01

表2 宋氏志贺菌与福氏志贺菌对常用抗菌药物药敏情况

抗菌药物	福氏志贺菌（n = 108）		宋氏志贺菌（n = 16）		χ²值	P值
抗菌药物	敏感株数	敏感率（%）	敏感株数	敏感率（%）	χ²值	P值
萘啶酸	13	12.04	7	43.75	10.361	< 0.01
左氧氟沙星	108	100.00	11	68.75	35.168	< 0.01
环丙沙星	97	89.81	7	43.75	21.859	< 0.01
诺氟沙星	108	100.00	7	43.75	65.504	< 0.01
氧氟沙星	107	99.07	7	43.75	57.528	< 0.01
头孢他啶	104	96.30	6	37.50	42.409	< 0.01
头孢吡肟	13	12.04	8	50.00	11.706	< 0.01
亚胺培南	108	100.00	16	100.00	—	—
阿莫西林	108	100.00	14	87.50	6.975	< 0.05
庆大霉素	6	5.56	12	75.00	48.706	< 0.01

表3 供体菌、受体菌与接合子对6种抗菌药物最低抑菌浓度（μg/ml）

抗菌药物	临床株			J53Az	接合子
抗菌药物	S12 aac（6’）	S21 qepA	S69 qnr	J53Az	T12 aac（6’）	T21 qepA	T69 qnr
萘啶酸	> 256	> 256	> 256	2	4	4	8
环丙沙星	2	> 32	16	< 0.0625	0.50	0.25	0.50
左氧氟沙星	1	16	16	< 0.125	2	1	0.5
诺氟沙星	8	> 128	32	< 0.25	0.25	0.50	1
庆大酶素	> 128	> 128	128	1	16	16	8
亚胺培南	< 0.25	< 0.25	< 0.25	< 0.25	< 0.25	< 0.25	< 0.25

表3 供体菌、受体菌与接合子对6种抗菌药物最低抑菌浓度（μg/ml）

抗菌药物	临床株			J53Az	接合子
抗菌药物	S12 aac（6’）	S21 qepA	S69 qnr	J53Az	T12 aac（6’）	T21 qepA	T69 qnr
萘啶酸	> 256	> 256	> 256	2	4	4	8
环丙沙星	2	> 32	16	< 0.0625	0.50	0.25	0.50
左氧氟沙星	1	16	16	< 0.125	2	1	0.5
诺氟沙星	8	> 128	32	< 0.25	0.25	0.50	1
庆大酶素	> 128	> 128	128	1	16	16	8
亚胺培南	< 0.25	< 0.25	< 0.25	< 0.25	< 0.25	< 0.25	< 0.25

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